资讯动态

细胞培养基合理消化细胞方法

2022-12-10 10:41:38
|
访问量:112052

  细胞培养基里消化细胞通常是指利用酶将细胞内的蛋白质、核酸等分子分解成小分子,以便于细胞内的代谢过程。常用的消化酶包括胰蛋白酶、胰苷酶、蛋白酶和核酸酶等。通常需要在培养基中添加适量的消化酶,并在适当的温度、湿度和pH条件下进行消化。需要注意的是,过多的消化酶可能会损害细胞的正常功能,因此需要适当控制消化酶的用量。

  我们都知道,细胞长满了就需要传代,而传代时的消化步骤是决定细胞传代后存活率的关键。不同的细胞贴壁程度差异、胰酶活性差异、甚至细胞在不同状态下贴壁程度都有差异,怎么才能找到一个合适的消化方法和时间呢?下面我们就说道说道怎么合理的消化细胞才能让传代的细胞长得更好。

  首先要选择合适的胰酶,胰酶活性太强或太弱都不行。活性太强的胰酶消化时间会很短,控制不好容易消化过度;活性太低的胰酶消化时间过长,细胞长时间泡在胰酶里也必然状态会变差,所以选择一种大部分细胞消化时间都在1-5min之间的胰酶比较合适。如果胰酶活性比较强,可以用PBS稀释几倍再用,胰酶活性比较弱的话那就只能更换了。一般新配的胰酶活性会比较强,保存时间比较久的胰酶活性会下降。

  其次,胰酶PBS完全培养基要复温后再用,不要用冰冷的液体接触细胞。胰酶消化前要用PBS润洗清除残留的完全培养基,尽量吸干净PBS,如果有条件的话可以PBS润洗两次或者PBS润洗一次再用胰酶润洗一次,每次润洗尽量吸干净残留的液体,避免影响胰酶活性。加胰酶后,轻轻晃动培养瓶,让胰酶尽量浸没瓶底的每一个地方,然后放到培养箱静置消化。消化到细胞在镜下观察间隙变大,然后在超净台里吸取正在消化的胰酶轻轻吹打细胞,如果消化好了就可以明显看到吹打过的细胞脱落一块。如果没有消化后可以放回培养箱继续消化30s左右再吹打看看,细胞可以脱落就行了。千万不要把细胞消化到完全漂浮或者成片脱落,这样就有点消化过度了,比较坚强的细胞还没什么问题,一些不好养的细胞就非常容易死亡。

图例

  最后,消化完成后再加完全培养基终止消化在吹下细胞混匀,一般加3-4倍胰酶体积的终止液就够了。一些贴壁比较紧的细胞建议消化完成后,吸取正在消化的胰酶先吹下细胞,再加终止液混匀吹打细胞,否则先加终止液的话细胞很快会重新贴回去导致吹不下来。


文章推荐
精准医疗:基因检测的市场分析
2021-10-15
基因测序技术发展迅猛,不断推陈出新,归根结底它还是一种科研或应用···
大鼠脓毒症造模实验操作步骤(手把手教你做大鼠脓毒症造模实验)
2023-04-14
尽管脓毒症的研究不断有新突破,其发病机制及病理生理学的研究也越来···
RNA的类型有哪些(7 种具有结构和功能的 RNA)
2022-01-20
什么是核糖核酸?它的完整形式是核糖核酸。这是由磷酸二酯键连接的亚···
分子实验-免疫组化实验注意事项(免疫组化染色实验操作规范)
2021-12-20
本文给大家介绍免疫组化实验注意事项及免疫组化染色实验操作规范,希···
喜报|立效顺利取得浙江省病原微生物实验室备案证书!
2024-09-09
8月19日,经过绍兴市卫生健康委严格审查和现场核查后,立效(浙江百越···
【声明】强烈谴责假冒「立效」的行为!请大家提高警惕!
2024-03-25
近日,科研服务市场上出现多起不法分子冒用「立效」名义进行服务宣传···
大鼠心脏纤维化造模操作步骤(手把手教你做大鼠心脏纤维化造模实验)
2023-04-16
心肌钙化,又称为心肌纤维化,是由中、重度的冠状动脉粥样硬化性狭窄···
细胞传代实验操作步骤(手把手教你做细胞传代实验)
2023-04-16
传代培养是细胞培养常规保种方法之⼀,也是几乎所有细胞生物学实验的···
  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

服务报价
打开微信—点击右上角扫一扫
×
在线留言
留言咨询
「扫码查看详细服务价格」

感谢您的关注,如有需要请留言,我们会尽快和您联系!