PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在组织学上主要用来检测组织中的糖类,也称为糖原染色。原理为过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,Schiff试剂可以和醛基反应使检体呈现紫红色。
实验步骤
1、脱蜡至水
二甲苯Ⅰ15min,二甲苯Ⅱ15min,无水乙醇5min,90%乙醇3min,80%乙醇3min,70%乙醇3min。蒸馏水3min,重复3次,PBS缓冲液3min,重复3次。
2、阿利新蓝染色液染色
使用阿利新蓝染色液对组织进行滴染或者浸染10-20min。用蒸馏水洗3min,重复3次。
3、氧化剂氧化
使用氧化剂对组织进行氧化5min。用自来水简单冲洗后,用蒸馏水重复洗2次,每次3min。
4、Schiff Reagent侵染
将组织放入Schiff Reagent染液中浸染10-20min(也可采用滴染),浸染结束后用流水冲洗10min。
5、复染细胞核
苏木素复染2min,细胞核变蓝色即可终止,自来水冲洗3min。
6、分化
酸性分化液分化2-5s,自来水冲洗3min。
7、返蓝
用Scott蓝化液进行返蓝1-2min,返蓝结束后用流水冲洗3min。
8、脱水
70%乙醇1min,80%乙醇1min,95%乙醇2min,100%乙醇4min。
9、封片
晾干片子,滴加适量中性树胶封片,盖上盖玻片。