大部分蛋白质在低温下都不会失活。但是低温处理也可以导致某些蛋白质变性。如L-苏氨酸胱氨酸酶室温下稳定，但在0℃不稳定。另外冷冻引起的浓缩效应可能导致蛋白质分子内、分子间二硫键交换反应增加，从而导致蛋白质变性。

　　蛋白质在低温下回失活吗

　　酶低温下降低活性，只是蛋白质的生理活性降低了而已，但是并没有失去生理活性。所以提高温度还是可以发挥催化作用的。它的本质也还是蛋白质。

　　天然蛋白质的严密结构在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失，如酶失去催化活力，激素丧失活性称之为蛋白质的变性作用(denaturation)。变性蛋白质只有空间构象的破坏，一般认为蛋白质变性本质是次级键，二硫键的破坏，并不涉及一级结构的变化。

　　变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低，同时蛋白质的粘度增加，结晶性破坏，生物学活性丧失，易被蛋白酶分解。

　　引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等；化学因素有强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠(SDS)等。在临床医学上，变性因素常被应用于消毒及灭菌。反之，注意防止蛋白质变性就能有效地保存蛋白质制剂。

　　变性并非是不可逆的变化，当变性程度较轻时，如去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，变性的可逆变化称为复性。例如，前述的核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键。在β-巯基乙醇和8M尿素作用下，发生变性，失去生物学活性，变性后如经过透析去除尿素，β-巯基乙醇，并设法使疏基氧化成二硫键，酶蛋白又可恢复其原来的构象，生物学活性也几乎全部恢复，此称变性核糖核酸酶的复性。

　　许多蛋白质变性时被破坏严重，不能恢复，称为不可逆性变性。

　　低温蛋白质层析时需要注意哪些方面

　　我们在纯化蛋白的时候，如果将温度降低，蛋白将更加稳定清爽。那么在低温条件下，使用蛋白质纯化系统做蛋白质层析时需要注意哪些方面呢？

　　预冷

　　我们所指的低温条件是指4度到8度条件，在这个温度下，蛋白质会比室温更加的稳定，此外，杂质蛋白酶活性降低，减少对蛋白质的降解。纯化条件从室温转移至低温可以通过将层析系统和层析柱搬移至冷库或者层析柜中来实现，那么在低温条件下纯化蛋白首先需要将层析系统，层析柱以及缓冲液和样品预冷至低温：

　　将层析系统，层析柱，缓冲液，样品预冷12小时以上直到与低温环境平衡；

　　由于温度降低会影响某些溶质的溶解度，和蛋白质样品的溶解度，可能会产生沉淀，请调整其浓度；

　　由于温度降低会影响缓冲液的pH值，例如Tris，请再次检测，并做调节。

　　检查层析系统

　　在蛋白质纯化系统中，虽然层析填料和预装柱都能够在低温条件下稳定运行，且每个产品的说明手册上都有低温条件下的适用范围和注意事项，使用前请及时参阅，但在此需要强调如下几点：

　　使用前检查冷库或者层析柜的低温温度是否稳定，第一步的预冷操作是否完成；

　　某些系统机型的UV检测器需要预热，请提前打开系统完成UV检测器的预热；

　　请注意层析系统各部件之间的连接，拧紧管线的接口，例如：每个阀门入口和出口的接头，层析柱的连接口等等，避免空气进入流路；

　　请将压力感应器归零，具体操作参阅层析系统的用户手册；

　　检查计算机是否能够在低温环境下操作，如遇故障，请将计算机移出低温环境。

　　降低流速

　　随着温度的降低，缓冲液的黏性升高，同一种缓冲液，同一流速运行，4度要比室温产生更高的系统压力。此外，在做亲和层析时，低温会影响样品与亲和填料的结合效果。因此，低温条件下，我们需要注意降低运行流速：

　　请检查压力感应器归零后，压力读值是否清零；

　　严格按照预装柱或者自装柱的限压参数设置报警压力值，禁止超压运行；

　　根据预装柱流速和填料的线性流速参数的推荐值，请将流速降低20%到50%；

　　如果使用20%乙醇或者黏性很高的缓冲液，根据推荐值，请再降低流速的40%到60%；

　　亲和层析，凝胶过滤层析时，需要降低流速最多可至50%，并且低温环境和低流速运行可能使蛋白吸收峰变得更宽。