分子实验-免疫细胞化学方案（ICC 方案）

2022-01-12 10:39:18

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　　标本制备

　　1. 在室温下用聚-L-赖氨酸覆盖盖玻片 5 分钟。

　　2. 吸出液体，让盖玻片完全干燥，然后在紫外光下消毒至少 30 分钟。

　　3. 在玻璃盖玻片上培养细胞。注意：如果标本是悬浮细胞，则需要细胞离心涂片或涂片制备。

　　免疫染色

　　1. 用 PBS 冲洗盖玻片两次。

　　2. 在室温下用 4% 多聚甲醛在 PBS 中固定细胞 15 分钟。

　　注意：多聚甲醛有毒，只能在通风橱中使用。

　　3. 吸出固定液，用 PBS 冲洗两次，每次 5 分钟。

　　4. 用 PBS 中的 0.1-0.5% triton x-100 通透细胞 10 分钟。

　　注意：仅当抗体需要进入细胞内部以检测蛋白质时才需要通透。这些包括表位在细胞质区域的细胞内蛋白和跨膜蛋白。

　　5. 吸出 triton x-100，在 PBS 中冲洗两次，每次 5 分钟。

　　6. 将细胞在 PBS 中的 10% 正常山羊血清中室温孵育 30 分钟。

　　7. 吸出山羊血清，将切片与适当稀释的一抗在 PBS 中在 4°C 下孵育过夜或在 37°C 下孵育 1 小时。

　　8. 在 PBS 中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

　　9. 在 PBS 中适当稀释的荧光染料偶联二抗在 37℃避光孵育细胞 1 小时。

　　10. 在 PBS 中在黑暗中冲洗 3 次，每次 5 分钟。

　　11. 用 1 μg/ml DAPI 孵育细胞。

　　12. 用一滴封固剂封固盖玻片。

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