实验室无菌操作的技术要点

　　无菌技术要点（1）

　　一、实验前的准备工作一定要到位：实验需要哪些仪器试剂、大概的实验过程、以及大概的实验时间。

　　二、操作时带一次性手套，操作一定要在超净工作台中进行。

　　三、在无菌室应该尽量少说话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。没有紧急事情一般不要在实验过程中随意进出无菌室。

　　四、培养基或其他溶液切勿在操作去外开封，在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

　　五、瓶盖应尽量盖好，仅在操作进行时才打开以尽可能减少空气污染和瓶盖误放。瓶盖打开时倒置于工作台面，防止瓶盖边缘被污染。

　　六、操作吸液装置时要把握住吸管末端，操作要稳、轻。吸液时吸管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。

　　七、用过的吸管、培养瓶等，必须弃置于垃圾容器中。

　　八、理想情况同时培养两瓶，即使一瓶污染也不至于细胞株失传。不同细胞系要单独进行操作，避免交叉污染。

　　无菌技术要点（2）

　　一、培养箱中细胞应定期在显微镜下进行检查。用完的细胞株不要长时间放置，要及时丢掉。

　　二、无菌室应每周用0.1%新洁尔灭擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。细胞房每两周需要清洁一次地面，先使用去污剂洗刷地面，再用含1%新洁尔灭的清水清洗地面，最后拖干地面紫外灭菌15分钟。

　　三、使用的物料应控制在最低限度，超净台上尽可能减少非培养用的器皿。

　　分子实验什么时候使用无菌技术

　　当必须进行无菌操作时。无论什么时候在进行活的有机体实验或是为进行活体实验而准备培养基、缓冲液、培养容器等时，必须使用无菌操作技术，例如：

　　· 准备转化用的大肠杆菌培养物

　　· 制备LB 平板培养基

　　· 分装细胞

　　· 过滤培养基的血清

　　· 打开和溶解冻干细菌

　　在无菌操作有帮助的情况下。如果不想容器或是区域中的物质进入另一个容器或是区域时，应该使用无菌操作。无菌操作对于实验室中的许多操作都适用，即使在操作那些高盐和／或去污剂等不会长菌的缓冲液时，也要小心不要把手上或者移液头上的油脂和灰尘混入溶液中。

　　在操作有害制剂时，如放射性物质或有毒物质，应该使用无菌操作。这样首先是保护自己。有时必须改变一些实验操作过程，在你和试剂之间建立一个屏障起到既可以保护自身，又可以保护试剂的作用，例如：

　　· 进行限制性酶切反应。限制性酶的污染是一个大灾难，虽然大部分酶是保存在甘油中，而且甘油浓度大于50 ％时通常是不会长菌的，但在稀释酶和进行没有甘油参与的操作时存在潜在污染的可能性，而且微量的常见元素的污染也会抑制酶的活性。

　　· 进行PCR 反应。PCR 反应中其他DNA 的掺入会导致灾难性的后果。进行PCR 反应时要使用无菌操作技术，而且不在有PCR 仪或进行PCR 反应产物分析的房间内操作可以避免偶尔的DNA 污染。

　　· 利用32P 磷酸盐标记细胞。这种情形下，使用无菌操作技术是出于对自身的保护，而不是出于保护细胞。出于无菌考虑，不应让盖子一直敞开、不能让气雾产生以及不要使用已经用过的移液管。