抗体-药物偶联物 (ADC) 的体外疗效是 ADC 开发项目中的一个重要参数。这是对 ADC 药物功效的首次定性评估，它为 ADC 改进提供了基线，并为下游工艺设计提供了指导。

　　ADC是一类新型靶向药物，具有增强的靶向特异性和药效。新一代 ADC 受益于有效载荷效力、位点特异性偶联策略和创新化学接头的一系列改进。ADC 发挥出色的抗肿瘤功效，同时提高了正常组织的安全性。良好的 ADC体外和体内功效是任何 ADC 开发项目的主要关注点，因为它是临床前研究的最终目标和临床评估的前奏。

　　在进行体内活性/效力评估之前，必须全面评估 ADC的体外功效，尤其是它们的细胞毒性。体外细胞毒性测定被广泛用于此目的。在这组测定中，针对表达靶向表面抗原的多种肿瘤细胞系测试了 ADC 毒性。ADC的体外功效通过细胞活力分析直接反映，其中通过各种有机染料评估 ADC 暴露后的活细胞总数。此外，细胞凋亡和细胞周期测定等其他测定也用于分析和确认ADC的亚细胞靶标和工作机制。最后但并非最不重要的一点是，在评估 ADC 时体外有效性，正常细胞也参与该测定，以评估所测试的 ADC 的体外安全性。

　　我们使用以下工作流程进行各种分析，以全面评估您的 ADC 的体外细胞毒性：

　　ADC体外细胞毒性测定的工作流程。在分析中，表达靶向抗原的癌细胞和正常细胞分别用于综合评估 ADC 的细胞毒性和安全性。

　　细胞系培养——培养表达靶抗原的癌细胞和正常细胞用于 ADC 毒性分析。

　　抗原表达验证——流式细胞术方法，如荧光激活细胞分选 (FACS) 测定，用于验证和量化目标抗原的表面表达，并评估 ADC 与抗原的结合。

　　细胞毒性测定— ADC 细胞毒性使用以下方法评估

　　细胞活力测定——用 Presto Blue、CCK-8 或其他试剂检测活细胞。

　　细胞凋亡测量——通过膜联蛋白 V-FITC、碘化丙啶染色或其他试剂检测细胞凋亡。

　　细胞周期分析——通过碘化丙啶染色或其他相应试剂检测细胞周期不同阶段的细胞。

　　数据分析——从这些分析中收集的数据使用适当的软件包进行编译和分析。

　　ADC体外细胞毒性分析。ADC的体外细胞毒性由来自细胞活力测定的 EC50 值反映（左），而 ADC 对微管组装的抑制作用通过荧光染色进行可视化（右，Mol Cancer Ther，2014）。