HK-2细胞培养建系背景

　　人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK2，取自正常成人肾脏的永生化近端小管上皮，通过转入HPV-16 E6/E7基因构建而成，并在无血清培养基中持续生长了一年多。HK-2的生长依赖于表皮生长因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。

　　阳性表达：碱性磷酸酶；γ-谷氨酰转肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；细胞角蛋白; α3β1 整合素；纤连蛋白。

　　阴性表达：因子VIII 相关抗原、6.19 抗原和 CALLA 内肽酶呈阴性。

　　HK-2细胞培养常见问题

　　在培养HK2细胞的时候，常会出现一些细节问题，不可掉以轻心。本文为大家总结培养HK2细胞常见的问题，以及解决方案。

　　01 出现空泡

　　空泡问题需要结合生长速度和形态来看：如果生长速度和形态正常，空泡可能是正常的细胞活动，传代后空泡即可减轻。

　　如果生长较慢，形态异常，空泡可能是自噬行为，可加大血清比例（不超过20%）或更换血清品牌改善细胞状态。

　　02 出现拉丝

　　细胞伸出细长的丝有两种情况：

　　第一种情况是HK2细胞迁移造成的，HK2细胞在培养皿上并不是静态的，也会出现迁移。迁移时HK2细胞的一部分滞留在原处，迁移的过程中会拉出一条细长的丝。这种情况下拉丝的细胞占少数，细胞整体的生长状态是正常的，不用特殊处理。

　　第二种情况是营养不良，拉丝的细胞占大多数，同时细胞生长缓慢，此时可以提高血清比例（不超过20%）或添加5 ng/mL EGF。

　　03 形态不对

　　正常的HK2呈铺路石状生长，如果HK2细胞呈镰刀状或不规则状（如下图），可能是因为培养环境发生了较大的改变，比如从有血清到无血清的转换，此时换回原来的培养条件细胞可逐渐恢复；如果细胞变得细长，这时候可能是营养不良。

　　04 生长缓慢

　　在普诺赛标准培养条件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3传代条件下，HK2细胞的传代周期约为3天。

　　当细胞生长缓慢，一周无法传代时，需要考虑培养基特别是血清是否合适。

　　选择合适的培养基及血清，同时加大细胞接种密度可以改善。

　　培养基选择

　　HK-2最初建系使用无血清培养，众多文献以及实践证明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的条件下，HK2细胞也能良好生长。

　　但胎牛血清的质量是关键，胎牛血清品质越高，HK-2状态越好。

　　若使用无血清培养基培养，需要使用多聚赖氨酸或者明胶包被培养瓶，以促使贴壁。