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2022-12-24
共转化,筛选转染细胞的实用工具
想要达到转染的目的,即分析转染基因的功能和表达,需要转染的基因稳定整合进入宿主染色体。根据细胞类型,细胞群体中,最高有80%的细胞,以瞬时表达的方式表达转染的基因。但对于稳定转染,好的情况,也只有1/1000的成功率——细胞能稳定表达转染的基因。所以,我们需要通过筛选活的新表型(标记)的细胞,来分
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2022-12-23
细胞培养中细胞生长减慢的原因
这种情况可能的原因包括:1.由于更换了不同培养液或血清,细胞需要重新适应。2.试剂保存不当,培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。3.培养物中有少量细菌或真菌污染。4.接种细胞起始浓度太低。5.细胞已老化。6.支原体污染。7.检查细胞传代是否频
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2022-12-23
真核细胞转染操作方法
一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉,然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确,或因折叠效率低下,结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此,真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工,例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等,而这些加
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2022-12-22
qPCR实验制作熔解曲线目的
荧光DNA结合染料法的缺点是它们能在反应中结合所有DNA双链,包括在实时荧光PCR中产生的引物二聚体,和其他非特异性产物,引起大量的背景噪声信号。这种噪声会影响我们对靶基因产量的评估,甚至荧光强度和靶基因的起始量、全长根本没什么关系。因此,我们使用荧光DNA染料结合法时,需要对扩增产物进行熔解曲线的
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2022-12-22
qPCR实验结果分析基本步骤(3个步骤)
实时荧光定量PCR实验会产生大量实验数据,一般可以用PCR仪自带的软件进行收集、分析。但即使有了方便可靠的软件,我们也需要对原始数据进行检查、再分析,评估数据的质量和可靠性。这需要三个基本的步骤。第一步,查看扩增曲线,有必要时调整基线和阈值。Ct值由基线和阈值计算得来,所以他们的值对结果影响
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2022-12-22
COD测定中常见问题及解决方法
作为是水质监测中必不可少的项目,COD测定经常会遇到各种各样的问题,这些问题的处理直接关系到废水处理的准确度,今天小编就为大家简单总结下COD测定中常见问题及解决方法。1、采不到试剂或水样报警(1)采样管堵塞造成无法提到试剂,检查堵塞位置,清洗或更换堵塞管路。(2)如果九通阀堵塞在外部无法清除堵塞
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2022-12-22
细胞转染实验中为什么推荐首选脂质介导转染
在细胞转染实验中,我们常常要根据不同的实验目的,转染细胞的不同,选择我们将要使用的实验方法。脂质体介导的转染是我们的首先选择,他具有易操作,重复性好,低毒性和适用于悬浮培养体系细胞的特点,在很多转染方法效率低的情况下,脂质体转染方法效果很好。其中,脂质介导转染试剂的典型,非脂质体型FuGENE
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2022-12-21
细胞培养中成团了怎么处理
细胞抱团一定代表细胞状态不好吗?细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:1. 若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,是状态好的,说明细胞在分裂。2. 但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消
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2022-12-21
HPLC四大常见故障及解决方法
高效液相色谱作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确方式操作的话,就容易导致一些棘手的小问题。其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。作为菜鸟的你,面对故障的色谱仪,还hold住吗?【高效液相色谱仪系统】液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对
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