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实验原理
天狼猩红(Sirius Red)是强酸性染料,易与胶原分子中的碱性基团结合,吸附牢固。胶原分子与天狼猩红结合后加强双折光现象,使不同颜色和形态的胶原纤维得以区分。 -
实验步骤
1、脱蜡至水:将切片依次浸入以下溶液
① 二甲苯Ⅰ 15min
② 二甲苯Ⅱ 15min
③ 95%酒精 30s
④ 80%酒精 30s
⑤ 75%酒精 30s
⑥ 流水洗 20s
2、染色:将切片依次浸入以下溶液
① Weigert铁苏木素 10min
② 流水洗 30s
③ 盐酸乙醇 15s
④ 流水洗 5min
⑤ 95%乙醇 12s
⑥ 天狼猩红染液 60min
⑦ 弱酸溶液清洗 24s
3、脱水:将切片依次浸入以下溶液
① 无水乙醇 12s
② 重复无水乙醇 12s
4、封片:
① 风干组织切片
② 用胶头滴管将中性树脂滴在组织上
③ 盖上盖玻片后轻轻按压,使中性树脂覆盖组织,静置晾干
5、显微镜观察并记录
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实验结果
I型胶原纤维:紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色。
II型胶原纤维:显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布。
III型胶原纤维:显示弱的双折光,呈绿色的细纤维。
IV型胶原纤维:显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色。