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实验原理
PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程，这一过程可以看作是生物体外的特殊DNA复制，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA，可用于基因分离克隆、序列分析、基因表达调控、基因多态性研究等许多方面。 -
实验步骤
1. 模板DNA
2. 引物
3. 四种脱氧核糖核苷酸
4. DNA聚合物
5. 反应缓冲液、Mg2等
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实验结果
二、反应成分：
1、模板DNA
2、引物
3、四种脱氧核糖核苷酸
4、DNA聚合物
5、反应缓冲液、Mg2等
三、基本步骤：
1、变性（denaturation）：高温加热，使模板DNA双链之间的氢键断裂，双链分开而成单
链（94℃，30s）
2、退火（annealling）：温度降低，使引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子（55℃，
30s）
3、延伸（extension）：在DNA聚合酶、dNTPs、Mg2存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链
（70～72℃，30～60s）以上述三个步骤为一个循环，每一循的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。
四、注意事项：
1、实验所用溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染
2、所有PCR试剂中使用的水都应是高质量的、新鲜蒸馏的去离子水，并且是用0.22μm过
滤及经过高压灭菌的
3、在20℃到25℃贮存的试剂建议添加类似叠氮钠的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试
剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应
4、所用试剂都应该以大体积配制，实验判断试剂是否符合要求，然后分装成仅够一次使用
的量进行贮存
5、准备试剂和样品的过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子
6、新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验
7、样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时应小心保存
五、荧光定量PCR中的常用术语：
1、CT值：荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数，或者说是从基线到
指数增长的拐点所对应的循环次数，CT值与起始模板的量成线性关系
2、阈值：阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍
