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实验原理
衰老细胞有高活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase),通过原位染色,以X-Gal为底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会生成深蓝色产物,通过光学显微镜即可观察。 -
实验步骤
细胞复苏生长
弃上清,用PBS轻洗2次
加入胰酶消化,显微镜下观察,细胞变圆收缩
加入完全培养基,吹打均匀,转移至离心管,离心
弃上清,加入新鲜完全培养基,吹匀
取适量细胞悬液加入EP管中,计数
在培养皿中铺入细胞,放入培养箱中培养4~7天,在第2~3天进行1次半换液
弃去培养液,PBS洗1次
加入β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定
PBS洗3次,每次3min
加入染色工作液,水浴锅孵育过夜
弃去染色工作液,加入PBS
荧光显微镜观察并记录
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实验结果