细胞免疫组化_浙江百越专注科研实验服务

实验原理

细胞免疫组化是一种研究细胞免疫功能的方法。细胞免疫是机体抵抗病原体和异常细胞的重要防御机制，它依赖于免疫细胞的活性和协同作用。细胞免疫组化利用荧光染料或酶标记的抗体，通过显微镜观察和定量特定免疫分子或细胞的分布和表达水平。
实验步骤
1. 细胞复苏生长
2. 弃上清，用PBS轻洗2次
3. 加入胰酶消化，显微镜下观察，细胞变圆收缩
4. 加入完全培养基，吹打均匀，转移至离心管，离心
5. 弃上清，加入新鲜完全培养基，吹匀
6. 取适量细胞悬液加入EP管中，计数
7. 将载玻片斜放入中皿利，在中皿里加入新鲜培养基，将细胞悬液滴在载玻片上，铺入细胞，放入培养箱中培养24h
8. 取出玻片，用PBS洗1~2次，甲醇固定10~15min，用PBS洗3次，每次5min
9. 免疫组化笔画圈
10. 阻断内源性过氧化物酶，用羊血清封闭液封闭
11. 玻片甩去多余封闭液体后，滴加一抗覆盖细胞，玻片平放于湿盒内，4℃孵育过夜，回收一抗，PBS洗3次，每次5min
12. 玻片甩去多余PBS液体后，滴加二抗，孵育90min后回收二抗
13. DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，氨水分化，自来水冲洗
14. 脱水封片，荧光显微镜观察并记录
实验结果

实验动态