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　　如果我们看一下典型流式细胞仪的对齐方式，我们会在细胞所在的一侧有一个光源，并且在流式细胞周围有一系列检测器来捕获由荧光染料发射或由荧光染料散射的光子单元格，如下图 1 所示。

　　图 1 ：WOLF 细胞分选仪的光学布置。

　　与任何流式细胞仪一样，我们可以对细胞的物理特性进行两种特征测量，通常称为前向散射和侧向散射，它们基于检测器相对于激光询问点的位置。

　　前向散射

　　前向散射位于与激光截距一致的位置，通常被认为是相对 细胞大小的量度。侧向散射通常位于垂直于激光束截距的位置，用于测量细胞的相对复杂性。总之，这些可用于帮助在宏观水平上表征不同的细胞群。

　　查看前向散射参数，我们实际上并没有测量细胞投射在检测器上的阴影。相反，我们测量了一种称为 Mie 散射的东西，以描述它的德国物理学家的名字命名。

　　简而言之，它描述了物体的光散射，它大约等于入射光，并受粒子和介质的折射率影响。它还受到散射光测量角度的影响，这取决于供应商。

　　图 2 显示了前向散射的概念。当细胞通过激光拦截器时，它可以散射光。这是由在线检测器测量的。由于激光非常亮，因此有一个条形阻挡激光照射到探测器（探测器前面的黑线）。收集的是虚线表示的光子。如图底部所示，像元尺寸越大，散射越“强烈”，如 Mie 理论所述。给定激光功率恒定，强度与散射横截面积成正比。

　　图 2 。流式细胞仪中的前向散射

　　如前所述，这也取决于粒子的折射率，因此给定一个折射率约为 1.361 1的单个细胞，聚苯乙烯珠粒大小相同，折射率为 1.605 2（在 488 nm ) 将具有不同的散射分布，因此，必须小心过度解释前向散射测量。

　　侧角散射

　　我们可以测量的另一个物理参数是侧角散射，它表示来自感兴趣细胞内部复杂性的散射。这受细胞成分如细胞核、颗粒等的影响。如果将淋巴细胞3与嗜碱性粒细胞4与中性粒细胞进行比较。5如下所示，很容易看出如何使用该侧向散射参数来识别这些主要的 PBMC 子集。

　　图 3 ：基于复杂性增加的不同 PBMC 的 Wright-Giemsa 染色。

　　通过流式细胞仪光散射测量这些物理参数的能力在它们结合时变得明显。可以提供第一个防晒霜对痤疮有帮助吗？t 顺序识别样本中的细胞亚群。这在下面的图 4 中显示。

　　图 4 ：使用物理参数识别细胞亚群。来自https://www.drugtargetreview.com/article/6339/flow-cytometry-not-just-a-box-in-the-lab/

　　虽然这些示例显示了从复杂混合物（血液）中分离异质细胞群，但这些参数即使对于其他同质细胞群（例如来自细胞培养物）也很有用。散射参数可用于识别培养物中的小碎片，以及较大的细胞聚集。由于流式细胞术是一种单细胞技术，因此去除这些聚集体是确保用于分析或细胞分选的高质量数据的重要步骤。

　　总之，流式细胞仪使用前向和侧角散射的物理参数来粗略地描述其样本中的细胞群。总之，它们是分析工作流程的重要组成部分，可以更好地表征样品。

　　资料来源：

　　张，秦南等。“通过相移干涉法和 AFM 成像相结合的单细胞定量折射率分布。” 科学报告 卷。7,1 2532。5 月 31 日。2017，doi:10.1038/s41598-017-02797-8

　　Stefka Nikolova Kasarova、Nina Georgieva Sultanova 和 Christo Dimitrov Ivanov 等人。光学塑料材料色散分析。 光学材料。 卷。29（11）：1481-1490。DOI: 10.1016/j.optmat.2006.07.010

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