脑出血发病急、进展快,严重时数分钟内即可出现严重恶化,甚至危及生命。
实验原理
本实验采用向大鼠脑内尾状核位置注入胶原酶的方法,造成脑出血。胶原酶是一种金属蛋白酶,能特异性降解血管内皮细胞间基质和内皮下基底膜胶原成分,从而引起出血。
实验步骤
01
将大鼠放入铁托盘中进行称量,麻醉。
02
等待大鼠麻醉后用胶带固定大鼠,俯卧式固定。
03
用碘伏消毒头部皮肤,正中失状切开,长度约15mm,充分暴露颅骨。
04
以前卤为原点,向其右方3mm处用牙科钻钻一直径约1mm的圆孔。
05
用微量注射器小心抽取含IV型胶原酶0.2U的生理盐水1μl,即称取0.5mg胶原酶,加入1μl生理盐水。
06
将微量注射器沿钻孔方向垂直进针,深约6mm(为尾状核位置),进针后缓慢而匀速地推动针柄,直至将注射器内的胶原酶完全注入脑内,整个推注过程约5min,注射完毕后留针8min,后缓慢退针。
07
缝合皮肤,伤口局部碘伏消毒。
08
血肿形成的高峰期在24h左右,即24h后断头取脑。
实验结果
待大鼠清醒后,参照Zea Longa 5级制评分法评价其行为能力:
0分,无神经功能缺失症状;
1分,轻度局灶性神经功能缺失,不能完全伸展左侧前肢;
2分,重度局灶性神经功能缺失(向左侧旋转);
3分,重度神经功能缺失(向左侧倾倒);
4分,不能自发行走,意识水平降低。
分值达到2分或2分以上,认为脑出血造模成功,死亡或2分以下者被剔除。