细胞培养对无菌环境的要求较为严格。微生物污染通常是造成细胞培养失败的主要原因，细胞间的杀菌主要涉及空气的杀菌，其常见方法如下。

　　紫外线消毒:

　　紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性 菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直 接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活， 间接作用是通过紫外线 照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。 紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关， 辐射强度随灯距离 增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射 时间要适合。离地面 2 米的 30W 灯可照射 9 平方米房间，每天照射 2－3 小时， 期间可间隔 30 分钟。灯管离地面 2 米以外要延长照射时间，2.5 米照射效果较 差。紫外灯照射工作台的距离不应超过 1.5 米，照射时间 30 分钟为宜。由于上述各种情况的不确定性，导致紫外线杀菌效果不是很理想，一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用，紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此不要在紫外线灯照射下进行操作。

　　甲醛熏蒸

　　甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性，使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”，用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质，并且细胞培养实验室一般空气流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要紧急使用的话，在甲醛灭菌完后，可以用等量的氨-水中和空气中的甲醛。

　　空气过滤

　　过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗 粒阻留，从而达到除菌目的。在体外培养时，过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。目前，大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。

　　细胞培养中常用的消毒方法

　　1.物理消毒法

　　(1) 湿热消毒（即高压蒸汽湿热消毒），最有效最常用。原理：通过高温高压及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而致使微生物死亡。应用：布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿以及某些培养用液。一般121℃，15-30min，0.1MPa。

　　(2) 干热消毒主要用于玻璃器皿的消毒。160℃±2℃，120min。

　　(3) 滤过消毒，用于人工合成培养液、血清、酶溶液的消毒。0.22μm，0.45μm孔径微孔滤膜。

　　(4) 紫外线消毒原理：射线直接破坏微生物核酸及蛋白等，应用：消毒空气、操作台表面和一些培养器具如塑料培养板等。

　　悬吊式或移动式紫外线灯消毒时，离污染表面不宜超过1m，消毒有效区为灯管周围1.5m～2m。紫外线灯管表面必须保持清洁，每1周～2周用酒精纱布或棉球擦拭一次，照射时间根据灯管强度及所杀灭病原微生物而定，时间不得少于30min。高强度、低臭氧紫外线杀菌灯，照射30s～60s，对物品表面消毒效果可靠。

　　(5) 电离辐射消毒。原理：使用Co-60γ射线、X射线和粒子加速器等发出的辐射能灭菌消毒。应用：消毒量不大和不适用于做高压或滤过等用品的消毒。

　　2. 化学消毒法常用的消毒剂：甲醛，环氧乙烷，乙醇，氯已定，戊二醛，碘伏。

　　（1）甲醛，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢和真菌等微生物均有杀灭作用，主要应用于消毒无菌室的空气和物品表面。

　　（2）环氧乙烷主要用于消毒塑料用品以及其他不耐高热高压以及不能耐受潮湿的物品

　　（3）乙醇应用于需要快速发挥作用而不必持续时间太久的消毒如皮肤消毒、物体表面消毒（4）氯已定用于皮肤及创面的消毒

　　（5）戊二醛的水溶液浸泡金属器械、温度计、橡皮、塑料管30min以上可灭菌

　　（6）碘伏与碘酊，碘伏用于操作者的手消毒和手术皮肤消毒，碘酒用于动物取材时的皮肤消毒

　　3. 抗生素消毒灭菌法。适用于培养用液的消毒，预防微生物污染以及轻度微生物污染时的“急救”措施。