细胞内细胞因子染色一种基于流式细胞术的检测方法，可检测细胞因子的产生和积累

　　细胞因子的产生在免疫反应中起重要作用。细胞因子参与许多不同的途径，包括 IFN γ 诱导许多抗病毒蛋白、IL-2 诱导 T 细胞增殖以及 TNF α 抑制病毒基因表达和复制。细胞因子不是预先形成的因子，而是响应细胞活化而迅速产生和分泌。

　　细胞内细胞因子染色 (ICS) 是一种非常有用且广泛使用的基于流式细胞术的检测方法，可检测细胞刺激后内质网内细胞因子的产生和积累。ICS 可与其他流式细胞术方案结合使用，使用细胞表面标志物或 MHC 多聚体进行免疫表型分析，以检测抗原特异性反应，使其成为一种极其灵活和通用的方法。

　　细胞内细胞因子染色的原理如下：

　　使用特定肽或非特异性激活混合物激活细胞

　　添加蛋白质转运抑制剂（例如布雷非菌素 A）以将细胞因子保留在细胞内

　　洗涤后，可以将针对其他细胞标志物的抗体添加到细胞中

　　然后将细胞固定在多聚甲醛中并透化

　　加入抗细胞因子抗体，细胞可通过流式细胞仪分析

　　应用

　　免疫监测

　　ICS 和 ELISpot 都可用于监测人类和动物研究中的相同功能反应。虽然 ICS 通常需要更多细胞，但 ICS 测定的灵活性允许更深入地研究细胞因子产生细胞。与更传统的杀伤分析相比，另一个优势是 ICS 可以在冷冻保存的细胞以及新鲜样品上进行。

　　使用 ICS 作为功能测试的主要缺点是细胞会响应各种刺激信号而激活，因此很难明确指出阳性染色（尤其是低强度染色）是真正的抗原特异性。与 ELISpot 或多聚体染色等其他功能检测结合使用，ICS 可以提供抗原特异性反应的有用支持证据。

　　表位发现

　　表位作图项目的目的是从免疫系统识别的蛋白质中识别和表征新的表位。通过识别新的表位，可以制定策略，为癌症或传染病等广泛的疾病领域生产免疫疗法或疫苗。

　　ICS 可用作表位发现项目的一部分，使用肽池。由于该测定需要大量细胞，因此 ELISpot 通常是筛选大量肽的首选功能测定。一旦预期表位的数量减少，ICS 是确定细胞对特定肽或少量肽的反应的好方法。由于 ICS 可以很容易地与流式细胞术中的抗体和 MHC 多聚体染色相结合，因此可以提供有关抗原特异性细胞的有用表型和功能数据。