在组织培养工作中，寻找不需要的受污染培养瓶会产生许多问题，包括过去和当前实验的数据有效性问题。

　　根据污染物的来源，您可以使用光学显微镜、革兰氏染色、等温扩增或 PCR 来检测细胞培养物污染。 虽然丢弃受污染的细胞培养瓶很有帮助，但实验室中有一些物品需要丢弃（例如正在进行的实验）或去污，包括培养箱和组织培养柜。

　　为防止污染，实验室人员必须始终遵循无菌技术程序。但是，当确实发生污染时，本文还将介绍一些识别细胞培养污染物的方法。

　　为什么尽量减少细胞培养中的污染很重要？

　　细胞污染会导致各种问题。它不仅会影响一项技术是否有效，还会影响您的实验结果和结果。污染还可以引入许多可能无法解释的变量。

　　因此，检测、处理和防止细胞培养中的污染至关重要，因为：

　　受污染的培养物会影响细胞的生长、形态、生理和新陈代谢，因此在研究中使用这些细胞可能会导致对结果的有效性产生怀疑，并撤回已发表的工作。

　　这些细胞可能会导致时间损失，因为有必要重复之前和正在进行的实验。

　　污染还可能导致几乎呈指数级的金钱损失，尤其是培养基、烧瓶和血清的成本。

　　一些微生物污染物可能对实验室人员造成潜在的健康危害，尤其是病毒污染物。

　　细胞培养中有哪些不同类型的污染物？

　　细胞培养中有两种污染物：化学污染物和生物污染物。

　　化学污染物通常来自设备、介质、水或血清。

　　至于生物污染物，最常见的原因是细菌、真菌和酵母。通常，这些类型的污染是显而易见的，您可以直观地检测到这个问题。然而，另一种污染物来源，如病毒，则更难检测和处理。

　　您如何识别细胞培养中的细菌和真菌污染？

　　细菌和真菌是培养的动物细胞中常见的污染物，它们的存在可以通过观察以下这些变化来检测（Geraghty等人，2014 年）：

　　无抗生素培养基的浊度增加。换言之，介质的颜色变得混浊。

　　pH 值的变化。例如，培养基会因细菌污染物而变为酸性，而真菌的存在会使培养基变为碱性。在含有酚红的培养基中，细菌更容易将培养基的颜色变为黄色。然而，当一些真菌污染细胞培养物时，培养基会变成粉红色。

　　光镜下形状明显。例如，可能会观察到团块或萌芽的小物体被真菌污染，而移动与细胞系形状不同的小物体可能表明存在细菌污染。

　　另一种检测细菌和真菌的方法是在特殊培养基中进行微生物培养。培养培养物后，使用革兰氏染色测试细菌细胞（Geraghty等人，2014 年）。要执行此方法，您需要准备一些溶液，包括结晶紫。

　　如果您需要革兰氏染色方案，GoldBio 有一个非常有用的方案，您可以在这里找到：革兰氏染色方案。

　　如何拯救受污染的细胞培养物？

　　通常，您可以立即去除受污染的细胞培养物，并从您的冷冻原液中开始新的培养物。然而，如果你真的需要保留它，拯救它的一种方法是用一些抗生素处理它，并在单独的培养箱中培养培养瓶中的细胞。在污染物完全清除后，建立冷冻库存以备将来工作，将剩余的培养物培养一个月，然后重新测试。

　　以下是一些常用于处理受污染细胞培养物的抗生素：

　　如何检测细胞培养中的支原体

　　支原体是一组通常污染细胞培养物的细菌，例如在人类细胞和其他哺乳动物细胞中。与其他微生物污染物类似，支原体污染会广泛影响细胞生理和新陈代谢（Nikfarjam & Farzaneh，2012）。

　　有许多方法可用于检测细胞培养中的支原体，包括在选择性微生物生长培养基上分离、使用 Hoechst 33258 直接或间接 DNA 染色、PCR、巢式 PCR、ELISA、放射自显影和免疫染色。

　　然而，检测支原体的一种有效方法是使用等温扩增法，例如 GoldBio 的试剂盒：certus QC-mycoplasma Detection Kit和certus QC-mycoADVANCED Detection Kit。使用这些试剂盒的优点是灵敏度高、简单、快速。

　　如何在细胞培养中检测病毒污染？

　　病毒污染很难在常规光学显微镜下观察到，但可以通过其他方法检测，例如电子显微镜、免疫组织化学和 ELISA 测定（Geraghty等人，2014 年）。此外，还可以使用特定引物进行 PCR 或 RT-PCR，以扩增目标病毒基因并识别污染物。

　　为了获得有关污染可能原因的初步信息，使用电子显微镜进行测试有助于发现病毒颗粒的存在。稍后，使用其他方法进行进一步测试，例如免疫组织化学或免疫荧光测定，也有助于了解有关病毒株的更多信息。

　　不幸的是，很难恢复被病毒污染的细胞系，因为没有治疗方法。因此，必须丢弃被污染的烧瓶，以防止其他细胞系的交叉污染。