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2022-01-01
分子实验-染色体免疫共沉淀(ChIP)测序原理及步骤
染色体免疫共沉淀(ChIP, chromatin immunoprecipitation)是一种用于研究蛋白质与DNA的体内相互作用的经典实验技术。采用特异性抗体将目的蛋白进行免疫沉淀,由此可以把目的蛋白所结合的基因组DNA片段也富集下来。通过与高通量测序技术的结合,对ChIP后的DNA产物进行测序分析,从全基因组范围内寻找目的蛋白的DNA结合
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2022-01-01
分子实验-高通量测序技术的应用与挑战(高通量测序的优缺点)
相比一代测序(Sanger 测序法),高通量测序具有测序快的优点,基本原理是将基因组断成一百多个碱基的短片段,对短片段进行测序,然后序列拼接,但高通量测序准确性较低,测序结果要通过矫正来提高测序准确度,随着三代测序技术的发展(三代测序的测序长度很长),一定程度上解决了重复序列的拼接问题。1. 高通量
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2021-12-31
分子实验-荧光定量PCR原理(如何实现对初始模板的定量)
在PCR反应体系中加入荧光基团,随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环收集一个荧光强度信号,通过荧光强度变化检测产物量的变化,最终得到得到一条荧光扩增曲线图,扩增曲线横坐标表示循环数,纵坐标表示荧光强度。图1:qPCR扩增曲线一般而言,荧光扩增曲线可以分为三
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2021-12-31
分子实验-Western blot实验结果是阴性怎么办
Western blot是最常用的实验方法,但意义并不寻常,其结果的有无往往决定着下一步实验的走向。当您辛辛苦苦地花费近两天时间提蛋白、电泳、转印、杂交之后,显色时却得到了“白板”一块,伤心沮丧之时,千万不要轻言放弃!请务必先试试我的建议:1. 打开冰箱,看看有没有其他显色试剂2. 走进隔壁,换换其他实
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2021-12-30
分子实验-荧光定量PCR实验中没有CT值(实验原理问题解析)
荧光定量PCR是生物医学中常用的检测核酸病毒的方法之一,由此,这几年PCR 仪也成了近几年临床检测和分子生物学研究的必备实验室设备。 我们知道CT值是PCR 扩增曲线中的重要参数,那么CT值是什么?它与 PCR扩增存在什么关系?为什么有的时候基因扩增实验中会出现CT 值异常甚至缺少CT值的情况?什么是CT值?在
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2021-12-30
分子实验-琼脂糖核酸电泳标准实验步骤方法
琼脂糖凝胶电泳是鉴定核酸、蛋白分子量的常用方法,通过琼脂糖凝胶电泳实验分析,可以有效地识别出核酸类型及DNA片段的大小。琼脂糖核酸电泳标准实验步骤方法1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:
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2021-12-29
分子实验-分子病理与检测技术(分子病理学诊断方法有哪些)
概述:疾病是一个极其复杂的过程。病理学(pathology)的任务就是运用各种方法研究疾病的原因(病因学,etiology)、在病因作用下疾病发生发展的过程(发病学,pathogenesis)以及机体在疾病过程中的功能、代谢和形态结构的改变(病变,pathological changes),阐明其本质,从而为疾病认识和治疗提供必要的理论基础。
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2021-12-29
分子实验-分子生物学须知道的概念及其意义(分子生物学知识点归纳)
1、反向重复系列:又称回文序列,指在双链DNA序列中按确定的方向阅读双链中每条单链的序列都相同的DNA结构。(成中心对称) 。2、分子杂交:双螺旋结构的各种性质在DNA复性后得到恢复,利用这一特性可将两个不同来源的互补序列退火形成双链,这个过程称为分子杂交。3、基因:是原核、真核生物以及病毒的DNA和RN
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2021-12-28
分子实验-明胶酶谱法检测 MMP 活性
细胞外基质( extracellular matrix , ECM )是由大分子构成的错综复杂的网络。为细胞的生存及活动提供适宜的场所,并通过信号转导系统影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增殖和分化。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)可以降解细胞外基质成份,需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子,是一组具有许多共
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