原代培养是指直接从机体取出细胞、组织和器官后立即进行培养，原代培养是建立细胞系的第一步。因此，较为严格地说原代培养是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养，原代培养的细胞叫做细胞株，一般持续1~4周。

　　细胞在体外培养过程需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态以及细胞有无移动、污染、培养基pH值是否变酸、培养基变黄是否需要更换等。细胞常规检查观察的方法有以下4种:

　　1.肉眼观察

　　一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养基的颜色和透明度的变换。正常情况下，培养基pH值介于7.2~7.4，呈桃红色,清亮透明。细胞加入培养瓶中在恒温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞生长旺盛，细胞代谢产生的酸性物质会使培养基pH值下降，引起颜色变浅变黄。如不及时调节pH值，会影响细胞的生长，甚至造成细胞蜕变死亡。另外，如发现培养基很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养皿没有洗干净。也可在显微镜下仔细观察有无污染。一般更换培养基的时间由营养物的消耗而定，通常每周换液两次，每次半换量或1/5~1/3量。若细胞生长停滞、死亡，则培养液颜色变红或紫红色，培养液pH值上升。总之，培养基颜色一旦出现变化，需要进行换液培养。原代细胞第一次换液培养时一定不要把原培养液全部倒掉，因为培养液中带有体细胞分泌的细胞因子，能提升细胞体外存活率。

　　2.显微镜观察

　　为保持原代细胞的生长活力，在培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态及培养基颜色的改变。生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。若细胞营养不良状况没有得到及时纠正，进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中。发现这种情况应及时处理，只有生长良好的细胞才能进行传代培养和实验研究。

　　3.细胞的生长状态观察

　　细胞培养时，经初代培养或传代培养，都有一个长短不同的潜伏期，在培养过程中注意观察细胞增殖生长的状态极为重要。各种细胞增殖的时间不尽相同，传代细胞系、胚体组织和

　　幼体细胞潜伏期短，一般在接种培养第2天即可见细胞生长增殖，3~4天便可连成片。成体组织、老年组织和癌组织潜伏期更长，可达1周左右。原代细胞培养中最先可见组织块边缘“长出”细胞，这种细胞是从原代组织块中游走出来的，并不是细胞增殖产生的。这种早起游离出的细胞多数是成纤维细胞，易生长，适应性强，呈放射状或旋涡状分布，很快生长并互相连接成网状。传代细胞在传代后，一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期、对数生长期、细胞大量繁殖、逐渐相连成片而长满瓶底。通常情况下，发现细胞覆盖瓶底的80%就应及时传代，否则会影响细胞生长甚至导致细胞脱落。当发现悬浮细胞生长显著、密度增大、分布稠密、培养基变黄也应及时传代。

　　4.微生物污染的观察

　　细胞接种、传代、换液加药后应经常观察,密切注意是否有微生物污染发生。一旦发现培养基浑浊、液体内漂浮着菌丝或细菌，或生长明显变缓，胞质内颗粒增多，有中毒表现等应怀疑是否有微生物污染，进一步观察检查并及时处理。