细胞培养常见七大的误区，细胞培养过程中存在的几大误区解析

　　细胞培养过程中时常会出现这样或那样的问题，别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问。通过与使用者的沟通，你会发现了很多可以避免的问题发生，下面对细胞培养过程中存在的几大误区做详细解析。

　　误区一:

　　XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基，我用一样的就可以

　　解析：

　　•选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：

　　1.首选：建立该细胞株所用的培养基

　　2.参考：文献

　　3.尝试：实验室常用的培养基

　　4.按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择

　　5.最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐

　　误区二：

　　长期使用抗生素，以对抗污染

　　解析：

　　1.细胞培养时不应常规使用抗生素

　　2.连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在，一旦将抗生素从培养基中去除，这种轻度污染最终将发展成大规模污染

　　3.连续使用抗生素会掩盖支原体感染及其他隐性污染

　　4.有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰您研究的细胞过程

　　误区三：

　　培养基中的谷氨酰胺容易降解，需要不断补充

　　解析：

　　1.如果正确使用，一般不需要补加

　　2.4℃避光保存

　　3.分装，不要反复预热

　　4.含有谷氨酰胺的培养基，开封后应尽快用完

　　误区四:

　　1.培养基误存于-20℃，溶解后继续使用解析：

　　2.在-20℃下，培养基中的盐容易析出，培养基再次融化后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致培养基营养成分和渗透压改变，培养细胞时，容易细胞破裂而死亡。

　　3.建议丢弃该培养基,重新购买新的培养基用于细胞培养。

　　误区五：

　　常见细胞系无需检测血清批次，可以直接切换解析：

　　1.血清来源于动物，组成成分有1000种左右，每个批号的组分和组分含量都是不确定的，批间差异是可能存在的

　　2.如果某一个批次血清使用效果较好，记住批号，订货的时候给予说明

　　3.如果需要换不同批号的血清，提前查询COA文件，寻找测试结果接近的批次

　　4.先订购一瓶试用，试用成功之后再大量订购该批号血清

　　误区六：

　　血清灭活以后使用效果更好解析：

　　1.血热灭活的血清对大多数细胞而言是不需要的

　　2.高温处理可能影响了血清的品质，造成细胞生长速率的降低

　　3.经过热处理的血清，沉淀物增多

　　4.灭活补体系统

　　5.补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞，刺激平滑肌收缩等

　　6.在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清

　　如何正确进行血清热灭活？热灭活是指将血清于56℃处理30分钟，灭活血清中的补体

　　误区七：

　　原代细胞的培养及操作与传代细胞一样

　　解析：

　　与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。

　　当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

　　通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

　　原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

　　我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

　　来源：Cellmax俱乐部