小鼠腹腔取材法——培养巨噬细胞的方法

2022-09-16 10:22:17

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　　巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW264.7等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：

　　1、实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。

　　2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

　　3、置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。

　　4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。

　　5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

　　6、小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g4℃离心10分钟，去上清，加10mlEagle培养基。

　　7、计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105细胞，其中90%为巨噬细胞。

　　8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106/ml。

　　9、为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1～2次后，再加新Eagle培养液置37℃，5%CO2温箱中培养。

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