在对细胞株进行计数时可能存在的误差来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利,器材处理、使用不当,稀释不准确,细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差;而由于仪器(计数板、盖片、吸管等)不够准确与精密带来的误差称仪器误差,由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正,但细胞分布误差却难于彻底消除。因此,搞好细胞计数的质量控制一般采用以下措施:
1.避免技术误差,纠正仪器误差
①所用器材均应清洁干燥,计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正。
②细胞稀释液应新鲜、无杂质微粒。
③严格操作,从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范,尤其应注意的是血样稀释及充池时既要作到充分混匀,又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室,防止产生气泡,充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。
④报告法定计量单位。
2.缩小计数域误差或分布误差
由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称Poisson分布,而我们所能计数的细胞分布范围是有限的,由此造成的计数误差称为计数域误差或分布误差。缩小这种误差的有效方法就是尽量扩大细胞计数范围和计数数目,一般先进行误差估计,然后决定所需计数的数目和计数范围,只要能将误差控制在允许范围内即可。
3.排除异常标本的干扰
白细胞数量在正常范围时,相对于红细胞数量来讲,其影响可忽略,但如白细胞过高,则应对计数结果进行校正。