筛选细胞株的一般步骤（三种方法浅析）

2022-10-08 10:44:22

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　　业内周知，混合稳定细胞株具有许多不同的稳定细胞株。因为稳定化的整合过程常常与失活的宿主内源基因的插入同时进行，稳定化的混合细胞株或比较多个单克隆稳定化的细胞株是实验准确数据的基础。由此，我们浅析常见的3种稳定细胞株筛选的发展情况。

　　稳定细胞株筛选的三种方法浅析

　　其一、96孔单克隆稀释法筛选稳定细胞株

　　96孔单克隆稀释法可用于低整合率的转染法，或用于稳定悬浮细胞系的单克隆细胞系和筛选实验。该方法的优点在于理论上可得到非常均匀的单克隆抗体，且能稳定筛选细胞悬液，是目前筛选稳定且高产率细胞株的理想方法。其缺点是工作量较大，需要大量劳动力来不断的分板、循环筛选稳定细胞株，已达到筛选高产率的稳定性单克隆细胞的目的。大湾生物利用人工智能技术开发出Klone4.0平台，既能智能精准筛选高产率细胞株，还能预测细胞株稳定性。

　　其二、单克隆环法筛选稳定细胞株

　　单克隆环法主要用于整合率低的转染法以及获得单克隆细胞株。单克隆环法具有工作量小的优点，只要把转染体细胞按一定的细胞密度放入新的培养皿，用合适的药物筛选并在培养皿中进行扩增，适合少量劳动力作业，其劣势可能难以获得高产率的稳定细胞株。

　　其三、逆转录病毒的混合克隆技术筛选稳定细胞株

　　此法可用于制备稳定混合细胞株，其优点在于能在短时间内得到稳定的细胞株，且能在任何时候将细胞稀释成新的培养皿，倾向于整合靠近转录始端的位点的基因，容易激活下游基因，但同时这些整合到转录活性基因的基因很容易导致整合部位基因的插入失效，影响到克隆的纯度。高等细胞株中存在非整合细胞，这种混合细胞内的细胞稳定结合，不会失去生长的优势。

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