细胞粘附实验方法

2022-10-12 10:33:13

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　　细胞粘附实验通常分为两类，即细胞与细胞粘附和细胞与基质粘附。机体内许多细胞，如上皮细胞固定在某处发挥功能；另一些细胞，如白细胞，活跃运动，就需要不断调节细胞粘附。细胞粘附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞相互识别及粘附机制发生了改变。

　　实验方法：

　　用10 μg/mL的纤连蛋白(fibronectin,FN)预铺96孔板，70 μL/孔，4℃过夜后，PBS洗3遍，再用1% BSA于37℃封闭1h，PBS洗3遍。将待测XXX细胞培养至对数生长期，消化细胞，用无血清培养基悬浮细胞，调整浓度为5×105/mL分别接种于预铺FN的96孔板中，每孔5000个细胞，每组设3个复孔。37℃孵育1h后，PBS洗去未黏附的细胞。

　　检测方法1：3.5%戊二醛于4℃固定0.5h，PBS洗3遍；0.1%的结晶紫染色，室温静止0.5h，PBS洗3遍，每孔加入100 μL 10%的乙酸，5~10min后用酶标仪检测595nm的吸光度值，用以表示黏附细胞的多少。

　　检测方法2：按照每孔加入100μL甲醇，固定15 min每孔加入100 μL吉姆萨染液，染色15min，PBS洗去染液倒置显微镜下随机取5个随机视野计数粘附细胞数量并拍照，统计结果。

　　检测方法3：MTT法或CCK-8检测细胞量。

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