细胞运动能力

　　细胞运动具有粘附性和趋向性。当细胞受到外界刺激时，细胞内的粘附趋化因子激活，根据刺激性质做出不同的反应，细胞在骨架蛋白的作用下细胞伸出伪足，会在支撑物上反复的粘附和脱离，向刺激点或者远离刺激点运动。不同的刺激条件下会有不同的反应，根据细胞对不同刺激的反应，一般使用细胞划痕实验、细胞迁移能力实验、细胞侵袭能力实验检测细胞的运动能力。

　　细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。

　　实验流程：

　　1.1、在六孔板中待细胞长满后，使用移液器枪头或其他硬物在六孔板中划1-3条平行的直线，加入PBS轻轻摇晃，去除PBS，重复使用PBS洗5次，以去除划出的细胞；

　　1.2、细胞分别培养0h、12h、24h后，观察细胞往中线迁移情况，同时使用ImageJ软件对划痕的距离进行检测，以判断细胞迁移能力。

　　悬浮细胞不适宜做细胞划痕实验。

　　细胞迁移和侵袭实验是体外模拟肿瘤细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中，将肿瘤细胞接种于小室中，利用培养液成分的差异诱导细胞运动，检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。

　　实验流程：

　　1 细胞迁移：

　　1.1、细胞经不同刺激后，去除细胞培养基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中，1000rpm常温离心5min；

　　1.2、使用无血清培养基将细胞重悬，使用血球计数板对细胞计数，接种5×104个细胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培养基，轻轻混匀后放入培养箱中培养8h；

　　1.3、去除上室和下室中的培养基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min；

　　1.4、加入PBS洗2次，加入结晶紫染色液，常温染色20min，使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞，加入水或者PBS洗两次，去除残留的染色液；

　　1.5、将transwell小室放在显微镜下拍照。

　　2 细胞侵袭：

　　2.1、将matrigel放入4℃冰箱融化过夜，加入预冷的PBS，1:3比例将matrigel稀释，使用预冷的移液器将matrigel加入transwell小室上室中，轻轻加入防止出现气泡，加好后，将transwell小室放入细胞培养箱中凝固30min；

　　2.2、细胞经不同刺激后，去除细胞培养基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中，1000rpm常温离心5min；

　　2.3、使用无血清培养基将细胞重悬，使用血球计数板对细胞计数，接种1×105个细胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培养基，轻轻混匀后放入培养箱中培养24h；

　　2.4、去除上室和下室中的培养基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min；

　　2.5、加入PBS洗2次，加入结晶紫染色液，常温染色20min，使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞和残留的matrigel，加入水或者PBS洗两次，去除残留的染色液；

　　2.6、将transwell小室放在显微镜下拍照。

　　结果示例：

图 A 细胞划痕实验图；B，C 细胞迁移和侵袭实验图