细胞复苏是指从冷冻状态中重新使细胞恢复到正常生长状态的过程。以下是细胞复苏的准备及步骤:
准备:
确认需要复苏的细胞种类和来源。
准备足够的培养基、血清和培养器材。
确认复苏过程中所需的试剂、材料是否齐备。
确认复苏操作区域清洁卫生,并采取必要的消毒措施。
(1)物品的准备:
超净工作台、酒精灯、废液缸、移液枪、培养瓶或培养皿、15ml离心管、培养基、离心管、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、水浴锅、离心机等。
(2)操作步骤:
①从液氮罐中取出冻存管。
②迅速放入37℃恒温水浴锅中,快速摇动冻存瓶,使细胞尽快解冻,约2-3分钟。
③剪开纱布口袋,取出冻存管,用75%酒精擦拭消毒后,净化台内打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入15ml离心管中,再补加2-3ml培养液,吹打使细胞悬浮。
④低速离心(800-1000rpm)离心5分钟。
⑤去除上清后,加入适量培养液重悬细胞后加入培养瓶中,摇匀后即可置于37℃恒温培养箱中培养,次日更换一次培养液后再继续培养。
需要注意的是,不同种类和来源的细胞复苏步骤可能有所不同。因此,在进行细胞复苏前应仔细阅读相关文献或咨询专业人士。同时,在整个复苏过程中,要注意细胞的无菌操作和培养条件的控制,以确保细胞生长的稳定和健康。