细胞实验中提取细胞质和细胞核蛋白的操作步骤

2023-03-18 10:35:49

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　　在细胞实验中提取细胞质和细胞核蛋白的操作步骤：

　　1.决定细胞生长状态，细胞生长状态应该是80%或者更好：

　　2.用离心机以1500r/min离心5min

　　3.弃上清液，用等体积的冷PBS洗细胞，像步骤2那样，反复3次

　　4.根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotonic lysis buffer到细胞颗粒中，使细胞温和悬浮，尽量避免泡沫

　　5.加入裂解液lysis buffer在悬浮的细胞中，并放在冰上15min让细胞膨胀，可以通过显微镜检查

　　6.对于细胞实验中膨胀的细胞，加入10%的IGEPAL CA-630使后的浓度达到0.3%，混匀，加的时候要温和

　　7. 立即离心（量大的可以用1.5mlde EP管，以5500r/min离心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min离心2min）

　　8.转移上清液（细胞质蛋白）到一个新的冷冻管中

　　9.用悬浮颗粒5倍体积的isotonic lysis buffer悬浮细胞，并混匀

　　10.用离心机离心细胞悬浮液，以1500r/min离心5min，移掉上清液

　　11.用2/3倍体积的extraction buffer悬浮颗粒

　　12.把管子放置在震荡混匀器上，以700r/min，15min震荡混匀，接着以1400r/min,15min,整个过程要仔细，避免泡沫产生

　　13.以9400r/min离心15min，离心完后转移上清液到一个新的冷冻离心管中

　　14.分成几份用液氮冷冻，并且保存起来（长期保存应放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）

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