细胞复苏需要用到哪些细胞培养耗材

2023-03-19 10:26:55

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　　细胞复苏是与相反的过程，即是细胞恢复生长的过程，是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。那么细胞复苏需要用到哪些细胞培养耗材，其步骤又是怎样的呢？

　　细胞复苏与细胞冻存不同，其过程升温要快，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。需要用到的细胞培养耗材包括培养瓶、吸头、冻存管、离心管、移液管等，复苏步骤如下：

　　①将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率，复苏过程中一般细胞死亡率在20%～25%之间。

　　②迅速用擦拭冷冻管外部杀菌消毒，然后放置在冰浴上。

　　③小心开启瓶盖，把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中，然后把培养瓶移至培养箱，36℃～38℃培养1h，让细胞贴壁。

　　④细胞贴壁后，小心移弃培养基，主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片，加5mL新鲜培养基，36℃～38℃培养。

　　⑤24h后，更换新鲜培养基，继续培养直到形成单层，便可以传代。

　　⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。

　　细胞复苏时要注意无菌操作，所用到的细胞培养耗材需经过灭菌处理，操作人员注意个人卫生，避免污染细胞，影响细胞培养进程。