支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物.约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性.可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH7.6-8.0)，对酸耐受性差。对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。

　　支原体污染细胞后.培养液可不发生混浊.多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解.因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢.甚至从培养器皿脱落。

　　支原体污染的检测

　　a.显微镜观察

　　直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈黑色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等区别开来。

　　b.PCR检测(MycoTest™ Kit)

　　利用降落聚合酶链式反应技术(TD-PCR)对支原体16S rRNA 基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。如果有支原体污染即可在400～600bp左右能看到一条很亮的条带。

　　该方法优点：快速，特异性强适用于一般实验室支原体检测预防。

　　c. ERA检测

　　用酶促重组等温扩增技术(ERA技术)和单分子荧光检验技术(SM@RT)，在恒定温度(37℃)下可对特异基因进行扩增及定性检测，通过实时荧光扩增曲线，在20分钟内即可判断样品中是否含特异基因，检测过程无需开盖，避免气溶胶的产生，结果可靠性大幅度提高。

　　d.荧光染色法观察

　　用荧光染料与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体成绿色小点，散于细胞周围或附于细胞表面。

　　e.电镜检测

　　若条件许可，可用扫描电镜或投射电镜观察。一般在细胞培养48-72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。

　　f.培养检测

　　将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养基有无雾状沉淀，然后取0.5mL加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。

　　处理：市场上有多种支原体清除试剂盒，效果比较好。

　　黑胶虫污染

　　黑胶虫可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。