病毒法
① 确定目标细胞系的相关信息,细胞的培养条件,细胞的增值速度,支原体污染情况;
② 预实验确定MOI值,可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据,设计梯度实验,摸索最适MOI;
③ 预实验确定筛选药物用量,常用的药物筛选有:puro、G418、潮霉素等;
④ 细胞铺板,将需要的细胞量接种于合适的培养皿中;
⑤ 细胞感染,通过接种的细胞量及预实验得来的MOI来计算添加的病毒体积;
⑥ 撤病毒,第二天,一般不超过24h换液;
⑦ 转染48h后选择对应的抗性药物进行筛选;
⑧ 筛选结束后进行单克隆化,选择阳性克隆进行培养。