1. 需要长势良好的细胞、trizol、PBS缓冲液、三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇、无RNA酶水或者DEPC水。
2. RNA提取怕的就是被RNA酶给降解了,所以要戴好口罩,操作台面干净卫生。
3. 细胞用PBS洗干净,洗净细胞碎片,细胞外泌物等,加trizol试剂,裂解细胞,后收集到离心管中,加入五分体积的三氯甲烷,混匀后室温静置10分钟左右,12000离心5分钟,能看到液面分层,取上层液体,不要触碰到中间层,要不然功尽弃了。
4. 取了上层后,加等体积的异丙醇,混匀冰上放置10分钟,再去12000离心5分钟,就能看到有沉淀了,把沉淀用75%乙醇洗两遍。
5.最后 ,后把管子的酒精倒掉,晾干,加水溶解,测定浓度和纯度。