细胞换液是指去除旧的培养基，换成新的完全培养基以继续提供细胞充足的营养支持。当旧培养基 ph 值改变（含酚红的培养基通常是变酸发黄）时，需要及时进行换液。在培养细胞的过程中，换液是一项非常常规操作，它主要是为了清除细胞在生长过程中产生的各种代谢废物，补充新鲜的培养基，促进细胞生长。细胞换液主要有全换液和半换液两种方式，那么，不同方式的换液方法如何更换细胞培养瓶内的溶液呢？

　　换液前工作准备

　　环境准备：相对密封、防尘、防菌的无菌室

　　操作者准备：双手清洁呈可操作状态

　　物品准备：超净工作台、CO2培养箱、装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、废液缸。

　　工作准备：预热完全培养基，酒精棉擦拭培养基瓶外表面后移入生物安全柜/超净工作台。

　　细胞培养箱中取出的细胞，酒精棉擦拭培养瓶/皿外表面，移入生物安全柜/超净工作台。可以稍等待，待生物安全柜中的循环风将试剂瓶和培养瓶的外表面吹拂几分钟后，拧开培养基瓶盖虚掩，拧开培养瓶瓶盖虚掩，培养皿盖不用拧。

　　第一种方式：细胞全换液

　　如果是贴壁细胞，可以用全量换液法，直接吸去全部旧培养基，补充足量新鲜完全培养基。

　　细胞全换液具体步骤

　　1.将器材放入超净台，打开紫外照射灭菌，若是培养的细胞对温度比较敏感，可以将含血清的培养基瓶放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃，再转移到超净台紫外灭菌。另外，细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。

　　2.从培养箱取出细胞培养瓶，用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒，转移到超净台，打开盖子，轻轻吸出旧的培养液，可用移液器加入新鲜含血清培养基，注意一定不要从细胞贴壁面加入培养基，应从侧壁加，动作轻柔，以免冲落细胞。

　　3.加好培养基后，盖上盖子，在瓶子上做标记，注明换液时间，细胞种类，操作人员等信息。

　　4.放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶子表面，然后应记得整理操作台，用酒精擦拭超净台台面，清理废液和垃圾。

　　第二种方式：细胞半换液

　　“细胞半换液”又称“细胞半量换液”，即弃掉一半旧的培养基，再加一半新的进去。选它的原因其实与前面不加PBS的理由有点相近。

　　半换液原因

　　1.给细胞提供适应的缓冲环境；

　　2.细胞生长过程中可能会分泌某些生长因子，促进生长；

　　3.节省材料

　　4.方便操作：比如96孔板，换液很麻烦。所以常采用排枪进行半换液；

　　5.对于悬浮细胞的培养，有时也会选用半换液减低细胞密度；

　　细胞半换液操作步骤

　　如果是悬浮细胞，可以用半量换液法。

　　1.即吸去一半旧培养基

　　2.补充新鲜完全培养基(会损失一半细胞)。

　　悬浮细胞如果不想损失细胞，那就需要将培养物转移到离心管中，离心去除旧培养基，再用新培养基重悬细胞沉淀。

　　细胞换液常见问题

　　1.细胞换液是否需要用PBS清洗？

　　我们知道，在“贴壁细胞传代”中，培养基中的血清会抑制胰酶的活性，影响消化的效果，所以必须要PBS 的清洗。

　　但对于细胞换液，尚未查到有资料明确说明是否需要PBS清洗。

　　这里应该根据细胞的具体情况考虑

　　a.若细胞比较“娇气”或生长状态不是特别好时，建议还是不要用PBS清洗。一方面，细胞贴壁的状态可能不是很牢固，PBS的冲洗会破坏细胞的贴壁状态；另一方面，PBS可能会洗掉细胞分泌的一些生长因子，这同样不利于细胞状态的调整。如果一定要洗，可以缓慢清洗，减少对细胞的伤害

　　b.当细胞生长状态不错，或者显微镜下观察细胞液中不是很干净时，可以选择用PBS清洗。一方面可以去除积累的代谢物；另一方面，也可将一些生长状态不好或衰老的细胞洗脱下来，保持细胞活力。

　　细胞换液注意事项

　　1.在进行换液操作时，全程注意无菌，操作人员要穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩，手接触到细胞培养瓶瓶口时一定要小心，避免造成污染。

　　2.加培养液时，不可直接加到细胞贴壁的面上。

　　3.换液前记得观察细胞的状态及拍照记录

　　不光细胞维持培养时需要进行细胞换液，一些实验操作也需要进行细胞换液。当换液操作是实验需要时，可能在添加新的培养基前需要 PBS 清洗细胞以去除旧培养基的影响， 新添加的培养基也可根据实验需求进行特殊配制，不一定是完全培养基。