MTT实验是一种常用的细胞增殖试验方法，其原理是通过将色素还原酶还原为可溶性紫色产物，从而间接测定细胞的增殖情况。在MTT实验中，细胞数量的计算是非常关键的步骤，因为只有准确计算细胞数量，才能得出准确的细胞增殖情况。本文将详细介绍MTT实验中如何计算细胞数的方法。

　　1.细胞培养

　　在进行MTT实验前，需要先将细胞培养在培养皿中。细胞培养的条件需要根据实验的需要进行调整，如培养时间、温度、CO2浓度等。在培养的过程中，需要注意细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长和死亡。

　　2.细胞传代

　　当细胞达到一定密度时，需要进行细胞传代，以保证细胞的生长状态。细胞传代的方法有多种，一般可以采用酶消化法或机械法来分离细胞。在进行细胞传代的过程中，需要注意消化酶的浓度和时间，以及机械分离的力度和时间，避免对细胞造成不必要的伤害。

　　3.细胞计数

　　在进行MTT实验前，需要对细胞进行计数，以确保实验中的细胞数量相同。常用的细胞计数方法有血球计数法、比色法和荧光法等。其中比色法是一种简便易行的方法，只需要将细胞取出一定量放入计数板中，加入一定量的显色液，通过比色板的标线进行计数即可。

　　4.细胞分装

　　在计数完成后，需要将细胞按照一定比例分装到96孔板中。在分装的过程中，需要注意细胞的数量和分装的均匀性，以保证实验的准确性。每孔的细胞数应该控制在1×10^4-1×10^5个之间。

　　5.细胞处理

　　将细胞分装到96孔板中后，需要进行细胞处理。细胞处理可以根据实验的需要进行多种方式，如加入不同的药物、改变培养条件等。在处理的过程中，需要注意处理的浓度和时间，避免对细胞造成不必要的伤害。

　　6. MTT染色

　　在细胞处理完成后，需要进行MTT染色。MTT染色的原理是将色素还原酶还原为可溶性紫色产物，从而间接测定细胞的增殖情况。在进行MTT染色的过程中，需要注意MTT的浓度和时间，

　　7.溶解MTT产物

　　在MTT染色完成后，需要将MTT产物溶解，以便进行吸光度的测定。可以使用DMSO来溶解MTT产物。在溶解的过程中，需要注意DMSO的浓度和时间，以及溶解的均匀性，

　　8.吸光度测定

　　将MTT产物溶解后，需要进行吸光度的测定。吸光度的测定可以使用多种方法，如酶标仪、分光光度计等。在进行吸光度测定的过程中，需要注意波长的选择和读数的准确性，

　　9.计算细胞数

　　通过对吸光度的测定，可以得出MTT产物的浓度，从而间接计算出细胞的数量。可以使用标准曲线法进行计算。标准曲线法的原理是根据已知细胞数量的标准曲线，通过测定MTT产物的吸光度值，计算出样品中细胞数量的值。在进行细胞数量的计算时，需要注意标准曲线的制备和吸光度值的准确性，

　　细胞数量的计算是MTT实验中非常关键的步骤，只有准确计算细胞数量，才能得出准确的细胞增殖情况。在进行MTT实验时，需要注意细胞的培养、传代、计数、分装、处理、MTT染色、MTT产物溶解和吸光度测定等诸多细节，以保证实验的准确性。