ELISA实验的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，然而根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件，可以设计出不同类型的检测方法。

今天，我们就综合整理了以下4种常见的ELISA检测方法，并从原理、优缺点、适用范围及注意事项这几方面进行区分，结合图文来了解一下吧~ 

1. 直接ELISA检测

 原理：将抗原固定在微孔板上，使用酶标抗体孵育抗原，最后加入酶反应的底物进行显色反应，显色产生信号与所结合的分析物量成正比。

优缺点：优点是操作简单快捷（ELISA检测中步骤最简单的一种），并且可以消除二抗的交叉反应；缺点是抗原固定不明确会导致潜在的高背景干扰，酶对一抗偶联物的免疫反应性可能会产生不利影响，一抗必须单独标记，费时又费钱。

适用范围：评估抗体的亲和力和特异性，研究阻断/抑制的相互作用。

注意事项：实验过程中的一抗特异性很重要。

2. 间接ELISA检测

原理：将抗原直接固定在微孔板上，首先将不带有标记的一抗加入微孔板，与板内抗原特异性结合，接着加入酶标二抗识别一抗，最后加入酶反应的底物进行显色，显色信号值与所结合的分析物量成正比。

优缺点：优点是经济灵活、敏感性强、标记抗体少，且单个二抗可用于检测不同的一抗，同时能保留一抗的最大免疫反应性；缺点是可能存在交叉反应，且可能导致非特异性染色，而相比直接法，操作流程更长。

适用范围：常用于测定内源性抗体。

注意事项：实验过程中的抗原纯度很重要，并注意正常血清中所含高浓度的非特异性抗体的干扰。

3. 双抗夹心ELISA检测

原理：双抗夹心法分为双抗体夹心法和双抗原夹心法。主要是将捕获抗体包被在微孔板上，加入样品后，捕获抗体与样本结合，然后再加入酶标记的检测抗体，形成夹心抗体对，最后加入酶反应的底物进行显色反应，显色产生信号值与所结合的分析物量成正比。

 优缺点：优点是具有高特异性和高灵敏度，能够与复杂的样品基质兼容；缺点是抗原必须拥有两个以上结合位点，且实验流程较长。

 适用范围：常用于确定生物样本中的分析物浓度。

 注意事项：不能检测小分子抗原或半抗原，需要甄选抗体对，避免交叉反应或竞争相同的抗原结合位点。

4. 竞争性ELISA检测

原理：将捕获抗体包被在微孔板上，加入标记的抗原，该抗原可与样本中的目标抗原竞争性结合捕获抗体，样品中存在的抗原越多，能够与捕获抗体结合的标记抗原就越少，加入底物并产生信号，信号值与样品中存在的蛋白量成反比。

优缺点：优点是具有高特异性，可以特异性地捕获和检测抗原，还能够定量小分子；缺点是整体的敏感性和专一性都较差。

适用范围：常用于定量检测含有低分析物浓度的样品、免疫应答等。

注意事项：适用于小分子和半抗原检测，如PEG2、Cortisol。