今天给大家分享【细胞凋亡流式图】～主要从以下几个方面展开：基础概念、细胞凋亡流式图怎么看、相关疑问与解答。

一、基础概念

检测细胞凋亡时，样本中除了有活细胞外，还会存在以下3种状态的细胞：

①早期凋亡（早调）

细胞膜结构变化：细胞膜结构发生改变，磷脂酰丝氨酸外翻，但细胞膜仍然保持完整。

检测方法：常用Annexin V/PI双染色法。Annexin V能与外翻的磷脂酰丝氨酸高亲和力结合，而PI无法透过完整的细胞膜（PI是一种核酸染料，在细胞膜完整的情况下，无法进入细胞染核），因此早期凋亡细胞仅被AnnexinV染色，而PI阴性。

②晚期凋亡（晚凋）

DNA降解：DNA被降解为约180-200bp的片段，这是晚凋的一个显著标志。

细胞膜破裂：细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放。

检测方法：Annexin V/PI双染色法检测时，PI能透过破裂的细胞膜与DNA结合，因此晚凋细胞同时被Annexin V和PI染色。

③坏死

细胞膜破裂：坏死细胞的细胞膜破裂早于DNA降解，导致细胞内容物外溢，引起局部类症反应。

检测方法：与晚凋细胞一样，在坏死细胞中，PI能透过坏死的细胞膜与DNA结合，因此坏死细胞能同时被Annexin V和PI染色。但PI染色会更为强烈一些，因为细胞膜破裂严重。

二、案例解读

Annexin V-FITC/PI双染显示，UVB（+）组中凋亡细胞的比例显著增加（占比23.2%），但在silibinin治疗后细胞凋亡的比例降低（占比7.4%）。

三、相关疑问&解答

①流式细胞术中的“设门”是什么？

设门就是在流式细胞仪生成的散点图或直方图上，通过手动或自动的方式划定一个或多个区域（即“门”），这些区域代表了具有特定特征的细胞群体（通俗点说，设门就是选中目标研究细胞群）。

设门的形状可以是任意的，如线性门、矩形门、圆形门、椭圆形门、多边形门和四象限门（十字门）等，具体形状取决于细胞类群分布的特点和研究目的。

②如何正确“设门”？

明确分析目的

在设门之前，首先要明确分析的目的，即需要区分哪些细胞群体。这有助于在复杂的细胞分布图中快速找到目标细胞。

选择合适的参数

流式细胞术可以检测多种参数，如前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）、荧光强度等。根据分析目的选择合适的参数进行设门。例如，FSC和SSC常用于区分细胞大小和颗粒度荧光强度则用于检测细胞内的特定分子

设定阈值

使用FSC或SSC等物理信号设定阈值，以排除细胞碎片、气泡和激光背景噪声等干扰因素。阈值设定应尽可能客观，以减少主观判断带来的误差。

联合设门

利用多个参数联合设门可以更加准确地区分细胞群体。例如可以使用FSC和SSC联合设门来区分不同大小的细胞群体，再结合荧光信号进一步区分表达特定分子的细胞。

应用荧光阴性对照

在设门过程中，应用合适的荧光阴性对照有助于区分阳性信号和阴性的荧光背景。这可以提高设门的准确性和可靠性。

排除死细胞

通过检测细胞活性的标记（如PI或7-AAD）来区分活细胞与死细胞。在设门时，应确保将死细胞排除在分析区域之外。

使用共享标记物

如果合适，可以使用一种在所有目标细胞中都表达的共享标记物（如CD45白细胞标记）进行染色。这有助于在分析稀少细胞类型时提高设门的准确性。

验证设门结果

设门完成后，应使用显微镜观察或其他验证手段来确认设门的客观性和准确性。这有助于减少主观判断带来的误差。