根据不同细胞采取不同的培养细胞传代方法。悬浮生长的细胞可以用直接吹打或离心分离后传代，或自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代。

　　细胞传代培养时常用的酶为胰蛋白酶，它可以破坏细胞与细胞、细胞与培养瓶之间的细胞连接或接触，从而使它们之间的连接减弱或完全消失。经胰蛋白酶处理后的贴壁细胞在外力（如吹打）的作用下可以分散成单个细胞，再经稀释和接种后就可以为细胞生长提供足够的营养和空间，达到细胞传代培养的目的。

　　（1）贴壁细胞的消化法传代

　　①吸除或倒掉瓶内旧培养液。

　　②向瓶内加入适量消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液），轻轻摇动培养瓶，使消化液流过所有细胞表面，然后吸掉或倒掉消化液后再加1~2 mL新的消化液，轻轻摇动后再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化。也可不采用上述步骤，直接加消化液进行消化。

　　③最好在37℃或25 ℃以上室温环境下进行消化。消化2~5 min后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现细胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即终止消化。

　　④吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hank’s液数毫升。轻轻转动培养瓶把残留消化液冲掉，然后再加培养液。加仅用胰蛋白酶可直接加少许含血清的培养液，终止消化。

　　⑤用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到。吹打时动作要轻柔不要用力过猛，同时尽可能不要出现泡沫，这些都会对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。

　　⑥计数，分别接种在新的培养瓶内。

　　（2）悬浮细胞的传代

　　因悬浮生长细胞不贴壁，故传代时不必采用酶消化方法，而可直接传代或离心收集细胞后传代。直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成细胞悬液后，再传代。悬浮细胞常采用离心方法传代，即将细胞连同培养液一并转移到离心管内，800~1 000 r/min离心5 min，去除上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打形成细胞悬液，然后传代接种。

　　（3）半悬浮细胞的传代

　　半悬浮细胞部分呈现贴壁生长现象，可不经消化处理直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来，而进行传代。但这种方法仅限于部分贴壁不牢的细胞，如Hela细胞等。直接吹打对细胞损伤较大，细胞也常有大量丢失，因而绝大部分贴壁生长的细胞均需消化后，才能吹打传代。