做实验之前需要准备的材料：

　　血球计数盘及盖玻片(Hemocytometer and coverslip)

　　计数器(counter)

　　低倍倒立显微镜

　　粒子计数器(Coulter counter, Coulter Electronics)

　　0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)

　　Erythosin bluish stain

　　取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl paraben (Sigma H-3647) 溶于100 ml Ca /Mg free saline

　　实验步骤

　　1 取50ml 细胞悬浮液与50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等体积混合均匀于1.5ml 小离心管中。

　　2 取少许混合液(约15ml) 自血球计数盘chamber 上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100 倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色- Erythrosin bluish)。

　　3 计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypan blue等体积混合)，zui后乘以104 ，即为每ml 中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。

　　4 大格*细胞总数x 2 x 104 / 4= 细胞数/ml*每一大格的体积= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml

　　4 若不用血球计数盘，可用Coulter counter 作自动计数，惟无法辨别死细胞或活细胞。

　　5 范例：T75 monolayer culture 制成10ml 细胞悬浮液，取0.1 ml 溶液与0.1ml trypan blue 混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。

　　活细胞数/方格：55 ,62, 49, 59

　　死细胞数/方格：5, 3, 4, 6

　　细胞总数= 243

　　平均细胞数/方格= 60.75

　　稀释倍数= 2

　　细胞数/ml：60.75 x 104 x 2 = 1.22 x 106

　　细胞数/flask： 1.22 x 106 x 10ml = 12.2 x 106

　　存活率：225/243﹦92.6 %

　　细胞计数板-计算公式

　　1、16格*25格的细胞计数板计算公式：

　　细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数

　　2、25格*16格的细胞计数板计算公式：

　　细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数