你永远不会忘记你的第一次实验。

　　通常，您会记住所有需要纠正的错误，以便将来进行实验。

　　在流式细胞仪中，第一次实验需要记住很多东西，所以有一个清单是有意义的。该清单分为三个阶段 - 实验前、仪器前和采集后 - 每个阶段都列出了步骤，以帮助您轻松进行第一次流式细胞术实验。

　　1. 流式细胞术实验前的准备工作。

　　在开始第一个流程实验之前，您应该做几件事来熟悉实验计划。首先是了解将用于染色细胞的协议。

　　与流式细胞仪工作人员会面。在计划您的第一个实验之前要采取的第一步是与管理您将使用的流式细胞仪的团队会面。这些人对流式细胞仪实验设计、执行和分析的来龙去脉有很好的参考。您可能已经接受过有关如何获取数据的培训，但是在开始实验之前，一对一的会议讨论您的分析并获得反馈是了解更多信息的好方法。

　　样品制备。对于那些从液体样品（池塘水、血液、悬浮培养细胞）开始的人来说，很容易得到单细胞悬浮液。在处理实体组织时，解离技术变得至关重要，Worthington 组织解离指南等参考资料非常好。当然，不要忘记在样品通过流式细胞仪之前对其进行过滤，尤其是在您计划进行分选实验时。最后，一定要在显微镜下观察你的细胞——评估单细胞悬液的质量是你最好的朋友。

　　收集和验证试剂。确保您拥有所需的一切，理想情况下，试剂已经过测试。使用一种你不知道会起作用的试剂，用一种新技术开始一个新的实验真的很令人沮丧。实验室的新成员可能会先用标准试剂对标准样品进行染色，直到您对整个过程的所有步骤都感到满意为止。该样本与分析中用作参考对照的样本相同，这意味着在如何执行该样本方面有大量经验。不要忘记了解试剂的任何特殊问题——例如，不要将串联染料放在光线下或工作台上任何时间，以免它们降解并变得无用。

　　预定时间。确保在习惯使用该软件时增加一些额外的时间。如果您已经与员工会面，请询问他们认为收购需要多长时间。当然，不要忘记在采集结束时增加时间进行必要的清洁。

　　2. 在细胞仪上。

　　现在是大日子——第一个实验。

　　与您第一次做的所有事情一样，它需要的时间比您预期的要长。遵守协议的耐心和关怀对于成功至关重要。深呼吸并开始。

　　仔细检查必要的控制。流式细胞术实验需要大量对照才能成功解释。这些包括：忘记控制，尤其是在第一次实验中，会使下游分析更加困难。这些控制在分析中都扮演着重要的角色，忘记一个可能意味着成功或失败。因此，请仔细检查列表。

　　补偿控制——用于设置补偿

　　荧光减一(FMO) 控件 — 用于辅助选通

　　生物控制 - 用于解决分析中的变化

　　QC 控制——通常是珠子，用于随着时间的推移监测分析的 QC

　　数你的细胞。确保您有足够的细胞进行实验非常重要。没有什么比意识到你没有足够的细胞来做需要做的事情更能破坏你的一天了。细胞计数有很多方法，

　　确保你有你的备忘单。让我们面对现实吧，当您学习如何运行分析器时获得的清单很重要。它将帮助指导您完成使用该软件的过程（一项新技能），并确保您不会忘记一个重要步骤（例如点击“记录”按钮来保存您的数据）。尽早并经常参考它。很快，这就像骑自行车一样，但现在备忘单是你前进的辅助轮。

　　准时到达，如果不是早一点的话。第一次出现抖动很常见，所以早点接触仪器并没有什么坏处。然而，迟到确实如此。如果你来早了，让工作人员知道，如果你有问题，看看是否有人有时间“待命”。此外，请确保以适当的方式将样品从实验室运送到流式细胞仪。像Igloo这样的冷却器是一个不错的选择，因为它们是顶部装载的，有一个封闭的盖子（“锁定”）并为您的样品提供二级容器。它们还可以保护样品免受光照。

　　注释您的数据。尽早养成为所有实验使用和输入关键字的习惯。在许多采集包中，您可以在实验级别、样本级别和试管级别添加关键字。当您在截止日期前数小时分析数据时，使用关键字并养成习惯将是一种奖励。您也可以在第三方软件中使用正确注释的数据做很多事情，因此请确保从一开始就利用这一点。

　　遵循协议。检查最佳电压建议，以及如何收集数据并将其导出以供日后分析。确保您收集了足够的事件。某些包默认的事件数量非常少，因此请检查以确保您收集了足够的数据。此时是运行样本并收集数据的时候了，直到最后一个试管完成。

　　3. 收购后。

　　到了——简单的部分就完成了。第一个实验已经完成并在书中。您的数据正在导出并保存到您被告知保存数据的位置。怎么办？

　　清洁机器。在下一位用户之前按照协议清洁仪器。做一个好公民有助于使核心设施运行更顺畅，给下一个用户带来更少的问题，总的来说是一件好事。例如，您知道将漂白剂留在进样口 (SIP) 上会杀死下一个用户的荧光吗？

　　仔细检查数据是否已导出。确保数据已正确存储，您将能够在以后访问和分析它。有时在导出数据时会出现问题，因此检查以确保每个样本都已导出（并且那里有数据）将节省您返回仪器再次获取数据的时间。

　　深呼吸 ，准备分析。在流式细胞仪上染色和运行实验是很容易的部分。困难的部分——在许多情况下是有趣的部分——即将开始。那就是对数据的分析。在这里，您将遇到自己的一系列新问题：从学习分析软件、克服“调整”薪酬矩阵的冲动、理解数据、将大门放在正确的位置等等。我们将保存您的第一次分析以供下次使用。现在，深呼吸，确保一切都清理干净，享受第一次实验的感觉。

　　你做到了。您已经从许多流式细胞术实验中的第一个中幸存下来。流式细胞术是一种非常强大的工具，如果实验设计得当，可以回答许多问题。使用此清单将帮助您每次设计和执行一致的实验。