真菌概述

　　真菌是一类具真核和细胞壁的异养生物。真菌可以通过孢子延续种群，典型的营养体为丝状分支结构。可污染细胞培养基的真菌种类繁多，最常见的有曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。

　　真菌污染症状

　　与其他污染相比，真菌污染更容易被观察到。具体表现为：

　　在培养基中会形成淡黄色或白色的漂浮物，肉眼可见，较易被发现

　　短期内培养液多不变混浊

　　显微镜下可以看见细胞之间或是培养基中，有纵横交错穿行的丝状，树枝状或管状菌丝

　　多数菌丝在高倍镜下可以观察到链状排列的菌株，而念珠菌及酵母菌菌株呈卵圆形，散落在细胞上及细胞周边生长。

　　真菌污染的鉴定

　　将待检测的细胞培养基，接种在真菌专用培养基上进行鉴定，例如：马丁培养基、沙氏培养基等。

　　真菌污染的处理方法

　　首先应尽快把污染细胞与其它细胞系隔离开，不要打开培养皿，以免孢子飞出；

　　同时需要对实验过程中所用的器材、试剂和操作空间做相应处理：消毒液喷洒、紫外线消毒、高温灭菌等；

　　高浓度的抗生素或是抗菌素（两性霉素 B 、泰乐菌素等）对细胞会产生一定毒性，在使用前可以进行剂量反应实验确定影响；

　　跟细菌污染的处理方法类似，通常情况下，霉菌污染的细胞，如果不是特别珍贵，建议直接丢弃。

　　与支原体和细菌不同，真菌是真核生物。真菌可以作为圆形或椭圆形体（酵母）存在，可以形成链或簇，也可以是长的细丝（菌丝）24。菌丝在污染的后期呈现模糊斑块状形成霉菌24。真菌污染是细胞培养中的一个严重问题，能够影响实验结果的有效性。更重要的是，这类型的污染极难根除，因为真菌可以通过孢子随空气流动传播。许多真菌种类的休眠孢子能在极端恶劣和不良环境中存活，一旦它们遇到合适的生长条件时就会被激活。

　　如何检测细胞培养中的真菌污染？

　　酵母是最小的真菌（3-10 μm）。它们可以透过光学显微镜看到。依据大小和生长阶段的不同，菌丝在一些情况下可以用肉眼或光学显微镜检测到。在大量污染的情况下，菌落形成的霉菌会浮在细胞培养表面。在这种情况下，不要打开容器并丢弃培养物，以免传播孢子。有时候，培养基的pH值可能增加，导致含酚红的培养基呈现粉红色。

　　清除真菌预防和清除用的试剂

　　Fungin™

　　• 高效：杀灭真菌（酵母、菌丝和霉菌）

　　• 快速：5-10天拯救细胞培养

　　• 安全：对哺乳动物细胞毒性极低

　　• 可靠：可作为预防方案

　　Fungin™是一种抗真菌化合物，通过破坏细胞膜上离子交换来杀死不同形式的真菌（酵母、菌丝和霉菌）。Fungin™拥有高度的稳定性，不需要溶解在具有细胞毒性的脱氧胆酸盐（deoxycholate）中，因此是两性霉素B（Amphotericin B）的一个很好的替代品。可分别在低或高浓度下用于常规的预防性使用或去除污染，对细胞培养中常见的真菌污染物（如白色念珠菌和曲霉）提供了最大的保护，同时也可添加到含有常用抗菌剂（如青霉素和链霉素）的培养基中。Fungin™亦是被文献高频引用的抗真菌试剂。