H9c2（2-1）（大鼠心肌细胞）是由胚胎BD1X大鼠心脏组织衍生的原始克隆细胞系的亚克隆，并表现出骨骼肌的许多特性。该细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，H9c2(2-1)细胞融合会发生得很快。该细胞系是检测细胞发育的有效模型系统[1]。

　　本期为大家总结了，在培养H9c2（2-1）细胞过程中，特别需要注意的地方。

　　细胞复苏

　　溶解细胞过程要迅速；已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久，需要尽快离心去除DMSO。

　　细胞冻存

　　推荐配比：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO的冻存液；

　　细胞冻存时，尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。

　　细胞培养

　　H9c2（2-1）细胞为贴壁细胞，正常细胞形态为梭形。

图1. H9c2（2-1）细胞正常形态

　　培养条件

　　培养基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

　　推荐传代比例：1:2-1:4

　　推荐换液频率：2~3次/周

　　培养箱：37℃，5% CO2

　　传代操作

　　去掉培养皿中的培养基，加入PBS进行冲洗，并去上清;

　　加入0.25%胰酶进行润洗，并去上清;

　　放入CO2培养箱消化2-4min;

　　加入完全培养基终止消化，并吹打均匀。

　　常见问题及解答

　　为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象？

　　可能是培养环境有问题，可以改用DMEM/F-12培养基培养，传三代后会恢复平整细胞表面。

　　为什么会出现空泡？

　　可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。

　　为什么细胞长得慢？

　　可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养。

　　为什么细胞状态变差，容易漂？

　　可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开；也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

　　注意

　　 在培养过程中，保持细胞汇合度30％～90％；

　　 每一步操作都要轻柔小心，以免细胞受损；

　　 选用优质培养基，减少有害物质对细胞的刺激。