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2021-12-12
分子实验-RNA实验操作方法
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码的小RNA分子，通过与靶RNA的3?UTR互补或部分互补结合，使其降解或介导其翻译抑制，参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢、发育、肿瘤转移等多种生物学过程.miRNAs基因通常位于基因间或编码蛋白基因的内含子中，在核内由RNA聚合酶II或III转录产生具有特征性茎环结构的pri-miRNA,然后在Drosha-DG
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2021-12-12
分子实验-PCR引物设计原则
首先引物要跟模板紧密结合，其次引物与引物之间不能有稳定的二聚体或发夹结构存在，再次引物不能在别的非目的位点引起DNA聚合反应（即错配）。围绕这几条基本原则，设计引物需要考虑诸多因素，如引物长度（primer length）、产物长度（product length）、序列Tm值(melting temperature)、ΔG值(internal stability)
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2021-12-11
分子实验-外泌体分离提取方法（提取方法及其优缺点解析）
外泌体的文章近十年的增长速度较快，新出的流式细胞仪也开始把最低检测限瞄准外泌体这个层级，所以有必要了解一下外泌体的提取，为检测打下基础。外泌体都有哪些分离提取方法？对于外泌体研究，分离和收集外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有：超高速离心、密度梯度离心、磁珠免疫、超滤法、聚合物沉
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2021-12-11
分子实验-蛋白质低温多少度失活（蛋白质在低温下会失活吗）
大部分蛋白质在低温下都不会失活。但是低温处理也可以导致某些蛋白质变性。如L-苏氨酸胱氨酸酶室温下稳定，但在0℃不稳定。另外冷冻引起的浓缩效应可能导致蛋白质分子内、分子间二硫键交换反应增加，从而导致蛋白质变性。
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2021-12-10
分子实验-免疫组化和免疫荧光区别（简单易懂）
相信很多新手研究人员在实验中，对免疫组化(IHC)，免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清，那么今天我们就来讨论一下这三者的区别，先贴图上来以便有个大致的区分。从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同，可以分为组织和细胞检测技术。因
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2021-12-10
分子实验-蛋白免疫印迹杂交
蛋白免疫印迹杂交是被许多科研人员用来通过抗体鉴定电泳分离样品中是否存在某特定蛋白的强大技术。该技术的完成需要三个基本步骤：电泳印迹转移、免疫印迹杂交和结果检测。在这些步骤之前，先要进行聚丙酰胺凝胶电泳，它根据蛋白分子大小将变性蛋白进行分离。
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2021-12-09
分子实验-蛋白质纯化后该如何保存？
如果遇到不同批次纯化的蛋白，采用同样的测试方法，活性可能会不太一样？有没有遇到过新纯化的蛋白，从冰箱拿出融化后，居然沉淀了？蛋白质毕竟是生物体内的大分子，提纯后如果保存不当，会很容易失活变性。下面就来聊一聊纯化后蛋白的保存问题。保存蛋白质纯化原则保存蛋白质应该遵循下面这几个原则:1. 低
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2021-12-09
分子实验-PCR引物Tm值计算方法是怎么样的?
在做PCR反应实验的时候，你是否遇到一些难以解决的问题？不知道Tm值的计算方法是怎么样的？不清楚PCR用引物的使用量?不了解简并性引物对PCR扩增有无影响?PCR (Polymerase Chain Reaction) 法是一种体外扩增DNA的方法。通过以下三个步骤：DNA链的热变性 (Denaturation step)引物退火 (Annealing step)聚
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2021-12-08
分子实验-如何自己构建质粒（质粒载体基本构建步骤）
载体构建(vectorconstruction)是把连接好的DNA分子运送到受体细胞中去。首先,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。当给质粒插入一段外源DNA段后，它依然能够进行自我复制。载体构建是分子生物学研究常用的手段
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