A. 试剂制备

　　用纯净水稀释 20X Wash Buffer（每个 BrdU ELISA 试剂盒均包括）来配制 1X Wash Buffer。

　　用 Detection Antibody Diluent（绿色）按 1:100 的比例稀释 BrdU Detection Antibody，以配制 1X 检测抗体溶液。

　　用 HRP-linked Antibody Diluent（红色）按 1:100 的比例稀释 Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody，以配制 1X HRP 标记二抗溶液。

　　用细胞培养基按 1:100 的比例稀释 BrdU，以配制 10X BrdU 溶液。

　　B. BrdU 掺入

　　将细胞放入 96 孔板上，并与相应的检测物质进行孵育。一般的种子细胞数目为 2500–100000 个细胞/孔，具体取决于细胞生长率。一般的孵育时间为 1-72 小时。

　　添加配制的 10X BrdU 溶液到平板孔中，以获得 1X 的最终浓度。示例： 如需往培养板添加 100 µl 培养基，则每孔添加 10 µl 10X BrdU 溶液。

　　将细胞放入恒温器。一般的孵育时间为 1-24 小时。

　　去除培养基。如需悬浮细胞，则以 300 g 的离心力离心分离平板 10 分钟，随后去除培养基。

　　C. BrdU 检测

　　按 100 µl/孔添加 Fixing/Denaturing Solution，并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液。

　　按 100 µl/孔添加配制的 1X 检测抗体溶液，并将平板放在室温下 1 小时。去除溶液，平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。

　　按 100 µl/孔添加配制的 1X HRP 标记二抗溶液，并将平板放在室温下 30 分钟。去除溶液，平板用 1X Wash Buffer 洗涤 3 次。

　　添加 100 µl TMB Substrate。

　　室温孵育 30 分钟。

　　注：观察颜色变化，因为可能需要在 30 分钟的标准显色时间之前停止反应。

　　添加 100 µl STOP Solution。

　　读取在 450 nm 处的吸光度（要获得最佳读数，则在添加 STOP Solution 30 分钟内读取平板）。