1

　　分离的细胞增殖得很慢，怎么办？

　　原代细胞对于起始接种密度是有要求的。另外，细胞接种到新的环境需要适应3-5天。建议保证合适的接种密度，48小时内静置培养细胞，不要移动细胞，避免破坏细胞微环境。

　　2

　　传代了20次，之后将细胞冻起来。假如再用这个细胞，这算第21代还是第1代呢？

　　冻存操作只是让细胞在超低温环境下处于暂停状态，不会影响代数，复苏后是第21代。

　　3

　　培养内皮细胞过程中，血清含量需要控制吗？

　　需要控制。通常5%的血清，可以保证内皮细胞的正常增殖，同时抑制其他细胞的增殖。

　　4

　　原代细胞换液的时候，培养基预热是必要的吗？培养基不温热是否会影响细胞状态？

　　培养基预热是必要的，减少环境的改变对细胞状态的影响，有部分贴壁不牢固细胞在受冷时容易收缩导致细胞漂浮，影响了细胞的状态，会延长细胞适应环境时间。

　　5

　　用P0滑膜细胞进行分选，滑膜间充质干细胞，没用到的细胞进行冻存了，可以把冻存的细胞拿出来继续分选吗？

　　可以继续分选。建议观察一下冻存后的细胞和P0代形态是否有较大的差异，分选尽可能使用活性状态好的细胞；冻存后会有部分细胞死亡，影响细胞得率、活性。

　　6

　　上皮细胞老是长不起来，怎么解决？

　　提高细胞密度，换用较小的培养皿培养；使用上皮专用培养基进行培养，培养瓶用0.1mg/ml胶原蛋白（鼠尾胶原）包被。

　　7

　　干细胞怎么增加传代代数，防止过早分化？

　　保证干细胞适宜的培养条件，选用较好质量血清或者用无血清专用培养基培养，细胞的密度达到了传代要求及时传代处理，每次传代比例控制一致，不要频繁更改。

　　8

　　癌细胞系没有接触抑制，会叠着长是吗？

　　是会叠着生长。但是大部分癌细胞生长还未叠起来，就因营养消耗过快，生存环境变差，导致部分细胞死亡。死亡的细胞会进一步影响正常细胞，导致癌细胞还未叠起来就全部死亡了。

　　9

　　胃腺癌细胞长得过快，有什么问题吗？

　　癌细胞在培养条件适宜情况下增殖较快属于正常现象；检测癌细胞相关蛋白表达是否正常，若正常表达，进行常规培养即可。

　　10

　　胰酶需要预热吗？会使消化活性降低吗？

　　胰酶需要在4℃的环境中保存，需要使其恢复常温再使用，消化时放37℃即可。不建议整瓶预热，反复多次预热会导致剩下的胰酶失活，影响消化活性。

　　11

　　小鼠星形胶质细胞能传多少代？

　　纯度和细胞状态都较好情况下，传3-5代是没问题的。

　　12

　　只用EDTA消化细胞可以吗？是不是损伤就很小？

　　可以只用EDTA消化细胞。因为其消化效果较弱，只建议用来消化贴壁不牢、极易消化细胞，贴壁牢的细胞没大的效果。

　　13

　　间充质干细胞，MSC需要用低血清培养基吗？消化也用特殊的消化酶吗？

　　常见间充质干细胞可用含正常血清含量的培养基进行培养；根据实验需求，可选择无血清培养基培养液。一般使用胰酶消化，但是会对细胞造成累积损伤，建议使用消化效果更温和的消化液进行消化（干细胞专用消化液）。