目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大的影响。

　　“黑胶虫”至今无明确定义，其是生物还是非生物？是细菌还是真菌？还是血清中的蛋白结晶？各有说法，且不同人员观察到的形态不一。

　　通过检测发现，“黑胶虫”主要为支原体污染，部分为未知的增殖不明显的细菌污染。

　　“黑胶虫”污染常见表现

　　1、培养液不浑浊，但在低倍镜下，“黑胶虫”呈黑色颗粒状或片状；在高倍镜下，黑色颗粒在原地进行“布朗运动”，并且“黑胶虫”与细胞数量呈负相关，且随着细培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；

　　2、“小黑点”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液；

　　3、“黑胶虫”污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。

图1. 黑胶虫污染

　　处理方法

　　若细胞状态尚可，添加黑胶虫/支原体抑制剂培养2-3代即可转阴；若细胞状态很差，建议消杀后丢弃。

　　预防措施

　　实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风机运转5-10min再开始实验操作；

　　实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于空气的流通；实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面；

　　每次操作只处理一种细胞，即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染；

　　操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖；

　　CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。

　　先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞；

　　定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

　　参考文献

　　[1] 周怡婷,高增鸿,杨嘉文, et al. 细胞培养中"黑胶虫"污染的检测及防治[J]. 生物化学与生物物理进展, 2020,47(1):8.