贴壁细胞和悬浮细胞培养步骤解析

2022-08-24 10:21:09

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　　贴壁细胞培养是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。悬浮细胞培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统，是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。

　　一、贴壁细胞培养步骤

　　1.接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。

　　2. 用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的) .

　　3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

　　4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)，放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。

　　5. 用PBS 2-3mL轻轻洗细胞表面，洗3-4遍，吸走PBS，加入0.25%胰酶EDTA 1ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻吹打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止消化。

　　6. 用900rpm, 3min离心，重悬细胞。

　　7.换新的细胞培养瓶，放置于37℃，5% CO₂的培养箱中培养。

　　二、悬浮细胞培养步骤

　　1.接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。

　　2. 用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。

　　3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。细胞吹打均匀。

　　4.细胞培养瓶内的细胞吹打均匀,用吸管将培养基完全吸出(严禁直接倾倒)。

　　5. 900rpm, 3min离心，重悬细胞。

　　6. 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，放置于37℃，5% CO₂的培养箱中培养。