冻存的细胞怎么复苏，冻存细胞复苏的步骤及注意事项

2022-08-24 10:43:29

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　　避免污染是培养细胞最关键的一部分了，这一步做好了我们才可以进行接下来的细胞复苏,培养,冻存等等步骤,今天我们就来说一下冻存细胞复苏的步骤及需要注意的一些问题。

　　1.解冻

　　从液氮罐中取出细胞，观察冻存管内没有多余液氮，迅速放入水浴锅中快速摇晃，直至冻存液完全融化。尽量越快解冻越好，在一两分钟内让冻存液融化。

　　2.离心

　　将冻存管的细胞900-1000rpm离心2分钟，准备好已经复温的完全培养基，10ml-15ml即可。

　　3.重悬吹散

　　离心好的细胞弃去冻存液，用准备好的完全培养基重悬细胞，将细胞吹散移到培养瓶中。

　　4.培养观察

　　记录好复苏细胞的名称,复苏时间及冻存批次，放入37℃培养箱，第二天观察细胞状态及存活率并换液。

　　冻存细胞复苏注意事项

　　1.复苏细胞最重要的一点是要避免污染，在复苏之前要对使用的物品进行灭菌处理，可以在超净台点上酒精灯。

　　2.在水浴锅中复苏细胞要尽快使其解冻，融化太慢或者整个复苏过程时间太长如会对细胞造成损伤，影响细胞存活率。

　　3.在将细胞移到培养瓶的过程中吹打要轻柔一点，尽量使其不能有气泡，刚复苏的细胞都比较脆弱。

　　4.在从液氮中取出细胞的同时也要注意自身安全，防护服护目镜这些也是要穿戴的。

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