1.合适的细胞培养基
培养基是维持体外细胞生存和生长的溶液，分为天然培养基和合成培养基。现在实验室一般都用的是合成培养基，合成培养基现已有DMEM,1640，IMDM,L15等，不同的细胞来使用不同种类的培养基，比如贴壁细胞大多都可以用DMEM来培养，悬浮细胞则大多用1640培养。
2.血清的品质
人工合成的培养基只能维持细胞生存，要想细胞生长和繁殖，还需补充优质血清来增加养分。血清是培养基里最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及营养成分。
3.无菌无毒的细胞培养环境
培养环境无菌无毒是保证培养细胞生存的首要条件。人体内有强大的免疫系统和解毒器官，所以当有毒物质侵入体内时，免疫系统和肝脏等器官可以对他们进行抵抗和清除。但是细胞在体外培养就失去了抵抗能力，一旦被污染细胞就会死亡，所以保持无菌无毒的环境是体外培养细胞最基本的条件。
4.恒定的细胞生长温度
要维持细胞增殖和生长，要有合适的温度。目前大部分实验室培养的细胞主要都是人、大鼠、小鼠、猪等哺乳动物的细胞，一般的细胞培养温度都是在37℃左右，在这种温度下细胞才可以生长和正常代谢。温度偏高时，高于39℃或者更高会对细胞造成损伤甚至是死亡；温度偏低时，不低于0℃虽然会影响细胞代谢和生长状态，但是不会使细胞死亡，恢复温度后大部分细胞都可以恢复生长特性。极少数实验室有昆虫细胞比如SF9、hi-five等需要在28℃的环境培养，具体培养温度一定要关注细胞库及相应说明书信息。
5.合适的气体环境
合适的气体环境也是细胞生存的条件之一，所需要的气体有O₂和CO₂。O₂产生能量使细胞生长增殖和合成各种所需成分，CO₂是细胞代谢物也是细胞所需要的成分，它的主要作用是维持培养基的pH。大部分培养基都是把细胞放置于95%的空气和5%的CO₂的混合气体中，但L15培养基作为单独设计的培养体系，需要直接在100%空气条件下培养细胞，若通入5%二氧化碳则会导致培养基pH偏酸性从而使细胞状态变差或者死亡。
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