细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

　　克隆形成的目的

　　1. 评价不同杀伤因素（药物、基因等）对肿瘤细胞增殖能力或群体依赖性的敏感性；

　　2. 评价细胞在体内成瘤性，癌细胞不一定都可以在体内成瘤，但若体外克隆能力越强，即表明体内成瘤性越强，算是一种模拟体内成瘤的体外实验。

　　细胞克隆流程

　　1 取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在完全培养基中备用；

　　2 将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每孔50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含2mL 37℃预温培养液的六孔板中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周；

　　3 经常观察，当培养板中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞1mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥；

　　4 将平皿倒置白色纸片上，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

　　克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%。

　　细胞密度为多少合适？

　　细胞接种密度与最终实验结果密切相关，若细胞太多，形成克隆数目太多，很难拍到单独的克隆团。而细胞太少，可能无法形成克隆，从而影响对该细胞增殖能力的判断。一般来说，正常增殖速度为1:5-1:10传代，3天长满细胞，可以接种500个细胞，其余增殖缓慢细胞，可以接种800-1000。

　　细胞接种后培养的时间，如何确定？

　　通常情况下，单个细胞在体外增殖6代以上所组成的细胞群称为一个阳性克隆，时间约为一周；但具体时间因细胞增殖能力而已异，因此应密切关注细胞生长情况，隔天在显微镜下观察克隆情况，若单个克隆细胞数到达50个左右即可固定细胞。

　　细胞铺板均匀的重要性

　　若铺板不均匀，细胞稀的地方形成的克隆少，而密的地方克隆多，一方面影响统计结果，并且拍出的图片不美观。

　　细胞未形成克隆的原因？

　　并非每种细胞都可以形成克隆，克隆形成率与细胞本身增殖能力有关。还与接种细胞密度，加入培养液的体积、血清浓度有关。因该实验处理时间较长，应给细胞多加培养基，如每孔4ml，或者3天更换一次培养基，以供给细胞充足的营养。