PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程,这一过程可以看作是生物体外的特殊DNA复制,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA,可用于基因分离克隆、序列分析、基因表达调控、基因多态性研究等许多方面。
下面我们就来了解一下PCR的具体操作步骤吧~
操作步骤
01提取RNA
取适量的动植物组织或培养细胞,加入适量的RNAiso Plus后匀浆,室温静置5min
4℃ 12000rmp离心5min,取上清
加入1/5 RNAiso Plus体积量的氯仿,振荡混匀,室温静置5min
4℃ 12000rmp离心15min,取上清
加入 0.5-1倍RNAiso Plus体积量的异丙醇和适量的核酸助沉剂,振荡混匀,室温静置10min
4℃ 12000rmp离心10min,弃上清保留沉淀
用与RNAiso Plus等量的75%无水乙醇清洗沉淀
4℃ 7500rmp离心5min,弃上清保留沉淀,开盖晾干3min
加适量的DEPC水溶解沉淀,轻吹混匀
02逆转录
逆转录采取20ul体系进行,使用Bio-Rad设备
03扩增
扩增采取50ul体系进行,使用Bio-Rad设备
04琼脂糖电泳