细胞复苏的原则：快速融化
必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
实验前准备
将水浴锅提前预热至37℃。
细胞实验室进行常规消毒，用75％酒精擦拭紫外线照射40min的超净工作台台面，保证无菌。
在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等即将使用的耗材及试剂。
取出冻存管
根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。
从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
迅速解冻
迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
平衡离心
用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3分钟。
制备细胞悬液
吸弃上清液。
向离心管内加入适量完全培养液，吹打制成细胞悬液。
用培养液悬液混悬沉淀细胞，细胞计数调整细胞浓度，放入培养箱中培养。
细胞计数
细胞浓度以5×105/ml为宜。
培养细胞
将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃，5％CO2的培养箱内2-4h（或者24-48h）后换液继续培养培养，换液的时间根据细胞情况而定。
记录复苏日期
如果复苏后95%以上的细胞贴壁，而且细胞的活性好，这就说明细胞复苏的过程没有问题。复苏的细胞恢复到正常生长，达到正常的生长特性（比如细胞群体倍增时间等）后要再冻存以补充细胞储存数量。
初学者易犯错误
水浴锅未提前预热或者未预热到37℃直接融化。
水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。
离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。
一次复苏细胞种类过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。
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